4.2. BIOLÓGIAI ÉS MIKROBIOLÓGIAI TÉNYEZŐK

A tífusz és paratífusz A, B és C bakteriológiai diagnosztikája

A bevezetés időpontja: a jóváhagyás pillanatától

1. FEJLESZTETT: FGUN St. Petersburg NIIEM őket. Rospotrebnadzor Pasteur (L.A. Kaftyreva, Z.N. Matveeva, G.F. Trifonova); GOUVPO "I. I. Mechnikovról elnevezett Szentpétervári Állami Orvosi Akadémia", a Szövetségi Egészségügyi és Szociális Fejlesztési Ügynökség (A.G. Boytsov).

3. A vezető jóváhagyta Szövetségi Szolgálat a fogyasztói jogok védelme és az emberi jólét területén végzett felügyeletről, az Orosz Föderáció állami egészségügyi főorvosa, G. G. Onishchenko 2007. december 29. 0100/13745-07-34

4. BEVEZETÉS a jóváhagyás pillanatától.

5. ELŐSZÖR BEVEZETÉS.

1 felhasználási terület

1 felhasználási terület

1.1. Az irányelvek rögzítik a tífusz és paratífusz A, B és C bakteriológiai diagnosztikájának alapelveit és jellemzőit; modern információkat tartalmaz a kórokozók biológiai tulajdonságairól, az antibakteriális gyógyszerekkel szembeni rezisztenciáról, az izolálásukhoz szükséges tápközegekről, valamint a tífusz és paratífusz kórokozóinak a Salmonella más szerológiai változataitól való megkülönböztetésének jellemzőiről.

2. Rövidítések listája

ABP - antibakteriális gyógyszer

BCA - bizmut-szulfit agar

MPU - egészségügyi és megelőző intézmény

MIC – minimális gátló koncentráció

P - köztes

U - stabil

H - érzékeny

RIF - immunfluoreszcens reakció

CNS - központi idegrendszer

A táblázatokban:

"+" - pozitív reakció az első napon;

"-" - negatív reakció 4-20 napig;

"(+)" - késleltetett pozitív reakció 2-20 napig;

d - különféle enzimatikus reakciók.

Lehetséges az enzimes változatokra való differenciálás.

3. Általános rendelkezések

3.1. A tífusz és a paratífusz A, B és C antroponotikus bélfertőzések, amelyeket Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B és Salmonella Paratyphi C. ritkán - paratífusz C. okoz.

3.2. A betegségekre jellemzőek a vékonybél nyirokrendszerének fekélyes elváltozásai, bakteremia, láz, súlyos mérgezéssel járó ciklikus klinikai lefolyás, rózsás bőrkiütés a test bőrén, máj- és lépmegnagyobbodás. A székrekedés gyakoribb, mint a hasmenés. Az ileum Peyer-foltjainak fekélyesedése az esetek körülbelül 1%-ában bélvérzéshez és a bélperforációhoz vezet, ami a legkedvezőtlenebb következményekkel jár a betegre nézve.

3.3. A tífusz és paratífusz A, B és C diagnózisa a betegség klinikai tünetei alapján történik, figyelembe véve a járványtörténetet és a klasszikus bakteriológiai és szerológiai módszereket is magában foglaló átfogó laboratóriumi vizsgálat adatait. A bakteriológiai diagnosztika kiemelt fontosságú, mert Ebben az esetben lehet a legtöbbet megszerezni teljes körű információ a kórokozó biológiai tulajdonságairól, beleértve az antibakteriális gyógyszerekkel szembeni érzékenységét.

3.4. Antimikrobiális szerek használata a etiotróp terápia A tífusz és a paratífusz egyrészt lehetővé tette a mortalitás 10-20%-ról 1% alá történő csökkentését, másrészt megnehezítette a laboratóriumi diagnózist, mert A laboratóriumi kutatásokhoz szükséges anyagmintavétel gyakran az antibiotikum-terápia megkezdése után történik. Ez a tény szükségessé teszi a kutatási anyag kiválasztásának, a vizsgált anyag és a kutatási technikák körültekintésének kérdését.

3.5. A tífusz epidemiológiájának modern jellemzője a fertőzések behozatalának (szállításának) gyakoriságának meredek növekedése a betegségben endemikus területekről, a közeli és távoli külföldi országokból, valamint az orosz lakosok fertőzése, amikor ezekbe az országokba távoznak. az országon belüli migráció folyamatában. Egy másik jellemző a magas járványügyi kockázatú nagy kontingens jelenléte állandó lakóhellyel nem rendelkező személyek formájában, akik között magas a tífusz előfordulása.

3.6. Ezen irányelvek a tífusz és paratífusz A, B és C bakteriológiai diagnosztikai módszereinek egységesítése, valamint a laboratóriumi vizsgálat eredményeinek helyes értelmezése érdekében készültek, figyelembe véve a klinika modern adottságait, kezelés és járványügyi helyzet bizonyos területeken.

4. Bakteriológiai diagnosztika indikációi

A tífusz és paratífusz A, B és C kórokozóinak jelenlétére vonatkozó biológiai anyag bakteriológiai vizsgálatának indikációja a vizsgálat szükségessége:

4.1) tífuszgyanús, valamint 5 vagy több napig tartó, ismeretlen eredetű lázban szenvedő betegek;

4.2) tífuszos és paratífuszos A, B, C betegekkel érintkező személyek;

4.3) egyes szakmák, iparágak és szervezetek alkalmazottai munkavállaláskor és járványügyi indikációk alapján;

4.4) a klinikai és járványügyi javallatok szerinti kórházi és szakszanatóriumi felvétel előtt;

4.5) személyek regisztrációkor kórházi kezelés pszicho-neurológiai (pszichoszomatikus) profilú kórházakba (részlegekbe), idősotthonokba, krónikus elmebetegek és központi idegrendszeri elváltozásokban szenvedők bentlakásos iskoláiba, más típusú, éjjel-nappal nyitva tartó zárt intézményekbe;

4.6) tífuszos és paratífuszos betegek a betegség klinikai tüneteinek megszűnése után a kórházból való hazabocsátás előtt;

4.7) az orvosi megfigyelés során tífuszban és paratífuszban megbetegedett személyek;

4.8) bizonyos szakmák, iparágak és szervezetek alkalmazottai körében azonosított krónikus baktériumhordozók, ezeknél a vállalkozásoknál és létesítményeknél történő újrafoglalkoztatáskor;

4.9) metszetanyag tífusz- és paratífusz-láz gyanúja esetén.

5. A módszer logisztikája

5.1. Normál vizsgáló- és segédberendezések, mérőeszközök mikrobiológiai laboratóriumok számára.

5.2. Tápközegek, diagnosztikai szérumok és kémiai reagensek a tífusz és paratífusz A, B és C kórokozóinak tenyésztéséhez, izolálásához, azonosításához és antibakteriális gyógyszerekkel szembeni érzékenységének meghatározásához.

5.3. A tífusz és paratífusz betegségek laboratóriumi diagnosztizálására és a baktériumhordozók kimutatására az Orosz Föderáció területén a megállapított eljárásnak megfelelően engedélyezett tápközeget és reagenseket kell használni.

6. Tífusz és paratífusz laboratóriumi diagnosztikája

6.1. A bakteriológiai módszer elve a betegség stádiumától függően különböző biológiai szubsztrátumokban (vér, vizelet, széklet, epe, csontvelő, roseola) élő mikroorganizmusok kimutatásán alapul. Ehhez bizonyos mennyiségű biológiai anyagot speciális táptalajra vetnek, majd termosztátban inkubálják, és azonosítják a S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B és S. Paratyphi jellegzetes mikroorganizmusok kifejlett kolóniáit. C, a kulturális és enzimatikus tulajdonságok és az antigén jellemzők szerint.

6.2. Csak egy bakteriológiai vizsgálat nyújthat pontos etiológiai diagnózist és a szervezet kórokozóból való felszabadulásának szabályozását. A tífusz és a paratífusz differenciáldiagnózisa tekintetében az egyetlen módszer a biológiai anyag laboratóriumi vizsgálata a kórokozó izolálásával és szerológiai variáns szintjéig történő azonosításával, tk. a fertőző folyamat klinikai lefolyása nem mindig teszi lehetővé e nosológiai formák megkülönböztetését.

7. Bakteriológiai vizsgálat

7.1. A tífusz és az A, B és C paratífusz kórokozóinak izolálása a bioanyagok bakteriológiai vizsgálatának ugyanazon sémája szerint történik.

7.2. Az anyaggyűjtés eljárása a laboratóriumi kutatás Az SP 3.1.1.2137-06 tífusz és paratífusz betegségekre határozták meg.

7.3. A bioanyagok összegyűjtésének és mikrobiológiai laboratóriumokba szállításának technikáját az MU 4.2.2039-05 írja le.

7.4. A tífusz és paratífusz diagnosztizálására szolgáló bakteriológiai vizsgálat anyaga:

vér;

ürülék;

vizelet;


A kórokozók izolálhatók a következőkből is:

roseol;

csontvelő;

anyatej.

A baktériumhordozók azonosítására szolgáló bakteriológiai kutatás anyaga az SP 3.1.1.2137-06 szerint:

ürülék;

vizelet;

epe (nyombéltartalom).

7.5. A metszetanyag tanulmányozása a diagnózis tisztázása érdekében történik.

7.6. A laboratóriumi kutatáshoz szükséges biológiai anyag gyűjtését az etiotróp kezelés megkezdése előtt végzi: tífusz-paratífusz fertőzésre gyanús egészségügyi dolgozó; csoportos és kitörési morbiditás esetén - a Rospotrebnadzor intézmények szakemberei és az egészségügyi intézmények személyzete. A kórházi betegektől a bakteriológiai vizsgálathoz szükséges anyagot a kórház sürgősségi osztályán veszik.

7.7. A betegekkel vagy hordozókkal kommunikáló személyektől (kapcsolattartók) az anyaggyűjtést az egészségügyi intézmények és más szervezetek és intézmények egészségügyi dolgozói végzik a betegek észlelésének helyén.

7.8. A laboratóriumi kutatásokhoz használt bioanyagot egy speciális irány kíséri. Az anyagok átadása az alanyok által nem megengedett. Ha az anyag időben történő szállítása lehetetlen, tartósítószereket és szállítóközegeket kell használni (1. táblázat).

8. Bakteriológiai vérvizsgálat

Vérvizsgálat jelzése tífusz-paratífusz megbetegedések gyanúja vagy ismeretlen eredetű lázas állapot (ismeretlen eredetű láz), 5 vagy több napig megfigyelhető (SP 3.1.1.2137-06).

A vér-tápközeg aránya 1:10-1:60 legyen. Az önállóan vett vérminták számát és levételük idejét a kezelőorvos határozza meg az ismeretlen eredetű lázra vonatkozó MU 4.2.2039-05 vagy a Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának MU 04-723/3. 1984) tífusz-paratífusz gyanúja miatt. Azoknál a betegeknél, akik antibakteriális gyógyszerek, közvetlenül a gyógyszer következő adagjának bevezetése (bevétele) előtt kell mintát venni.

Láz jelenlétében optimális a vérvétel a testhőmérséklet-emelkedés hátterében (de nem a hőmérséklet csúcsán!). A táptalajra történő vetés közvetlenül a beteg ágyánál történik.

Tífusz-paratífusz megbetegedések gyanúja esetén Rapoport táptalaj, 20%-os epeleves, hús-peptonleves 1% glükóz hozzáadásával (100 ml-es fiolákban) használható a vértenyésztéshez. Korábban használt vértenyészetek steril desztillált (csap)vízben. Előnyös azonban speciális vértenyésztő tápközeg használata.

Az elvetett vér mennyisége a láz magasságában 10 ml, későbbi időpontban - legfeljebb 20 ml (gyermekeknél - legfeljebb 5 ml) lehet.

5 napon túl tartó, ismeretlen eredetű láz esetén általában több vérmintát kell megvizsgálni. A vénából történő vérvétel a MU 4.2.2039-05 szerint történik. Erre azért van szükség, hogy megkülönböztessük a valódi bakteriémiát a véletlen vérszennyeződéstől a vénapunkció során (a faggyú- vagy verejtékmirigy véletlen szúrása miatti mintaszennyeződés valószínűsége 3%). Ebben az esetben két táptalajt használnak a vértenyésztéshez: 1) táptalajt aerobokhoz és fakultatív anaerobokhoz és 2) táptalajt kötelező anaerobokhoz (például "kettős" táptalaj + tioglikol táptalaj a Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának rendelkezése szerint 85.04.12-én kelt N 535) vagy univerzális közeg aerobok és anaerobok számára.

Előnyösebb iparilag előállított, Oroszországban használatra engedélyezett hordozót használni.

A növényeket 37 °C-on inkubáljuk 10 napig, napi megfigyelés mellett. Ebben az esetben a "kettős" közeggel ellátott fiolákat megdöntjük, lemosva a közeg sűrű részét.

A növekedés jeleinek hiányában a 10. napon nemleges választ adnak ki.

Ha a növekedés jelei vannak (a Rapoport táptalaj zavarossága, vörössége, látható telepek megjelenése a "kettős" táptalaj sűrű részén), a vetést párhuzamosan poliszénhidrát táptalajra és sűrű táptalajra Petri-csészékben végezzük ( véragar ismeretlen eredetű láz esetén és Endo medium tífuszos paratífusz megbetegedések gyanúja esetén).

A poliszénhidrát táptalajra történő közvetlen beoltást a vizsgálat idejének csökkentése érdekében végezzük, abból a feltételezésből kiindulva, hogy ha nagy valószínűséggel vért oltunk be, a kórokozó monokultúra növekedése figyelhető meg. Ennek a feltételezésnek a szabályozásához és a tiszta tenyészet izolálásához az egyes telepek felosztásával párhuzamos Endo táptalajra vagy véragarra van szükség.

Ha ezeken a táptalajokon monokultúrás növekedés figyelhető meg, akkor figyelembe lehet venni a polikarbonát táptalaj biokémiai tulajdonságait. A tenyészet tisztaságának ellenőrzése érdekében Grammal festett poliszénhidrát táptalajról kenet mikroszkópos vizsgálata szükséges. Ebben a szakaszban a megfelelő agglutináló O- és H-szalmonella szérummal üvegen is lehetséges agglutinációs reakciót felállítani és előzetes választ adni.

A tífusz- és paratífusz-gyanús betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémáját az 1. ábra mutatja.

1. ábra. A tífusz és paratífusz gyanújában szenvedő betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémája

1. ábra. A tífusz és paratífusz gyanújában szenvedő betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémája

Az ismeretlen eredetű lázas betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémáját a 2. ábra mutatja.

2. ábra. Ismeretlen eredetű lázas betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémája

2. ábra. Ismeretlen eredetű lázas betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémája

A tenyészet kulturális-morfológiai, enzimatikus tulajdonságok és szerológiai jellemzők alapján történő további azonosításának menetét a vonatkozó fejezetekben ismertetjük részletesebben.

9. A széklet bakteriológiai vizsgálata

A székletmintát a székletürítés után azonnal fertőtlenített és alaposan kimosott edényből veszik, amelynek aljára vastag tiszta papírlapot helyeztek. Az anyagot egy steril tartály fedelébe szerelt kanál spatulával gyűjtik össze. Spatulával ellátott edény hiányában bármilyen steril eszközt (steril fa spatula, dróthurok, kanál stb.) használunk az anyag felvételéhez. Kóros szennyeződések jelenlétében ki kell választani a nyálkát, gennyet, pelyheket tartalmazó, de vértől mentes területeket. A folyékony székletből mintákat veszünk steril műanyag Pasteur pipettával, zárt tartállyal.

A kivett anyag térfogatának legalább 2 g-nak kell lennie Az optimális anyag, ha díszített szék esetén az anyagot - dió mennyiségben - szedjük; laza széklet esetén annak rétege a tartályban legalább 1,5-2,0 cm legyen A steril edénybe helyezett anyagot 2 órán belül a laboratóriumba szállítjuk.

Ha az anyagot 2 órán belül nem lehet a laboratóriumba szállítani, akkor konzerválószerben (közeggel szállító rendszer) gyűjtjük. Az anyag térfogata nem haladhatja meg a közeg térfogatát.

A székletet gondosan homogenizálni kell a közegben. A minták a vizsgálat megkezdése előtt napközben hűtőszekrényben (4-6 °C) tárolhatók.

A tífusz és paratífusz A, B és C kórokozóinak, valamint az akut bélfertőzések egyéb kórokozóinak izolálására használt szállítóközegeket és tartósítószereket az 1. táblázat tartalmazza.

Asztal 1

A széklet szállítására leggyakrabban használt szállítóközegek és tartósítószerek

Környezet neve	Konzerválást biztosít
Szerda Carrie Blair	minden enterális kórokozó, beleértve a Campylobactert is
Szerda Ames	minden enterobaktérium
Szerda Stewart	szalmonella és shigella
glicerin keverék	minden enterobaktérium, kivéve a yersiniát; a sigellához preferált
foszfát puffer keverék	minden enterobaktérium
borát pufferoldat	minden enterobaktérium
sóoldat	minden enterobaktérium, beleértve a campylobactert is

A rektális tampon segítségével közvetlenül a végbélből vett székletmintákat elsősorban a diagnózis tárgyiasításához használják (MU 4.2.2039-05). Az anyagot a mentősök veszik át. Általános szabály, hogy egy speciális szonda a kenet vételére a szállítási rendszer része. Fontos megjegyezni, hogy a szállítóközeg bejutása a végbél nyálkahártyájára elfogadhatatlan! Ezért a rektális tampont csak az anyag felvétele után szabad a szállítóközegbe meríteni. A pácienst arra kérik, hogy feküdjön az oldalára úgy, hogy a csípőjét a gyomorhoz húzza, a fenekét pedig széthúzva tenyerével. A tampon szondát 4-5 cm mélyen a végbélnyílásba helyezzük, és a tengely körül finoman forgatva anyagot gyűjtenek a végbélnyílás kriptáiból. Óvatosan távolítsa el a tampont, és merítse a szállítóközegbe. Tampon szállítása közeg nélkül nem megengedett.

A laboratóriumban a székletminták beoltása közvetlenül sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra és ezzel párhuzamosan a dúsító táptalajra történik.

A széklet bakteriológiai vizsgálatának sémája a 3. ábrán látható.

3. ábra. A széklet bakteriológiai vizsgálatának sémája

3. ábra. A széklet bakteriológiai vizsgálatának sémája

A natív ürülékből 0,9%-os nátrium-klorid-oldatban 1:5-1:10 arányban szuszpenziót készítenek, és 30 percig hagyják állni, hogy a nagy részecskék leülepedjenek. Ezt követően a felülúszóból egy cseppet sűrű tápközeget tartalmazó edényekbe oltunk, és 1 ml szuszpenziót a dúsító táptalajba (az anyag-tápközeg aránya 1:5 legyen).

A laboratóriumba tartósítószerben (szállítóközegben) szállított ürüléket az oltás előtt a táptalajban gondosan homogenizálni kell, majd az anyagot közvetlenül szilárd táptalajra és dúsító táptalajra oltjuk a natív ürülékkel megegyező arányban.

A rektális tamponnal vett székletmintákat a tartósítószerben szállított széklethez hasonló módon vizsgálják. Emlékeztetni kell arra, hogy a végbéltampon kevesebb mikroorganizmust tartalmaz, mint a natív székletben, ezért az oltóanyag adagját növelni kell.

Az S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B és S. Paratyphi C maximális kimutatása a székletben dúsító táptalaj használatával érhető el, bár a betegség akut periódusában lévő betegeknél a kórokozót gyakran közvetlen oltással izolálják. A direkt oltással párhuzamosan dúsító táptalajra történő oltás kötelező!

Minden beoltást 37 °C-on inkubálunk differenciáldiagnosztikai táptalajon 18-24 óráig, bizmut-szulfit agaron 24-48 óráig, 24 óra elteltével a dúsító táptalajból történő oltást szilárd táptalajra (bizmut-szulfit agar vagy Endo) végezzük. közepes). Az ezekre a kórokozókra jellemző, sűrű táptalajon nevelt telepeket poliszénhidrát táptalajon szűrjük ki.

Meg kell jegyezni, hogy az anyagnak a lemez felületére sűrű tápközeggel történő szétterítésének technikájának biztosítania kell a tipikus típusú izolált telepek növekedését, amely felhasználható a mikroorganizmus tenyésztési tulajdonságainak vizuális értékelésére.

A bizmut-szulfit agar (BCA) az előnyben részesített módszer az S. Typhi izolálására. A S. Typhi tipikus kolóniái feketék, és fémes fényű fekete vagy barna peremmel vannak körülvéve. Az S. Typhi azonban gyakran nem eredményezi az ICA jellegzetes elfeketedését, amikor bőséges növekedés következik be, ezért a lemezeket be kell oltani, hogy lehetővé tegyük az egyetlen telep növekedését.

A székletminták beolthatók az Orosz Föderációban engedélyezett enterobaktériumok standard szelektív táptalajra. Azonban a bizmut-szulfit agar az előnyben részesített módszer a S. tymhi izolálására. A tenyészetek enzimatikus tulajdonságok és szerológiai jellemzők alapján történő további azonosításának menetét a vonatkozó fejezetekben ismertetjük részletesebben.

10. A vizelet bakteriológiai vizsgálata

A vizelettenyésztést diagnosztizálják a betegség első napjaitól egészen a beteg elbocsátásáig, valamint a bakteriohordozó azonosítására. Mivel a kórokozó tífuszos és paratífuszos kiválasztódása a vizelettel időszakosan és rövid ideig fordul elő, a vizeletvizsgálatot 5-7 napos időközönként meg kell ismételni.

Szigorúan tartsa be a vizeletgyűjtésre vonatkozó általános szabályokat, amelyeket az MU 4.2.2039-05 tartalmaz. A vizeletfelvétel módjától függetlenül 2 órán belül a laboratóriumba kell szállítani, szélsőséges esetben a vizelet egy éjszakán át hűtőszekrényben tárolható.

Emlékeztetni kell arra, hogy attól függően kémiai összetétel vizelet, a benne lévő baktériumok tárolás közben elpusztulhatnak és elszaporodhatnak.

Az anyag eltarthatósági idejének növekedése rendkívül megnehezítheti az eredmény értelmezését.

A vizelet (vagy a centrifugálás utáni üledék) közvetlen beoltása előzetes dúsítás nélkül történik a Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának N 535-ös rendelete szerint sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajokon, amelyeket szalmonellára, beleértve a tífusz és paratífusz kórokozóit is ajánlanak. Ezzel egyidejűleg a natív vizeletet kétszeres koncentrációjú dúsító tápközegbe oltják be 1:1 arányban, vagy a vizeletüledéket normál koncentrációjú táptalajba. Az oltásokat 37 °C-os termosztátba helyezzük 18-24 órára, majd a dúsító táptalajt sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra oltjuk. A szilárd táptalajon nevelt telepeket kulturális-enzimatikus és szerológiai tulajdonságok alapján azonosítják.

11. Az epe (nyombéltartalom) bakteriológiai vizsgálata

Az epét a MU 4.2.2039-05 szerint három steril kémcsőben vagy steril eldobható tartályban külön-külön A, B, C részekben gyűjtik össze, és szállítják a laboratóriumba.

Vizsgálja meg mindegyik adagot (A, B, C) külön-külön, vagy készítsen három rész keverékét. A minták beoltása:

sűrű differenciáldiagnosztikai közegeken (ICA, Endo, EMS stb.) 0,5 ml mennyiségben;

kémcsőben (üvegben) táplével 1:10 arányban. Nem szükséges epét dúsító táptalajra oltani, mint maga az epe jó táptalaja a tífusz és paratífusz kórokozóinak.

A beoltott tápközeget 37 °C-on epemaradékokkal inkubáljuk.

18-24 óra elteltével a beoltásokat sűrű táptalajra vizsgáljuk (24 és 48 óra elteltével vesszük figyelembe az ICA-n történő növekedés eredményeit), és a gyanús telepeket poliszénhidrát táptalajra újra ültetjük.

A táplevesből sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra magokat készítenek.

A visszamaradó epéből direkt vetés negatív eredménye esetén 18-24 óra elteltével, valamint a 3., 5., 7. és 10. napon ismételt vetést végzünk sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra.

A tenyésztett mikroorganizmusokat kulturális-morfológiai, enzimatikus és szerológiai tulajdonságaik alapján azonosítják.

12. Roseola anyagának bakteriológiai vizsgálata

A bakteriológiai vizsgálatot ("kaparás" roseolával) jól meghatározott roseola jelenlétében végezzük. Az anyagot aszeptikusan gyűjtik össze. Ehhez a roseola feletti bőrfelületet 70%-os etil-alkohollal kezeljük, majd steril 0,9%-os nátrium-klorid-oldattal megnedvesített vattacsomóval töröljük le, majd steril törlőkendővel szárítjuk.

A kutatáshoz szükséges anyagot (szövetfolyadékot) úgy állítják elő, hogy a roseola feletti bőrt szikével súrolják. 1-2 csepp epelevest vagy izotóniás nátrium-klorid oldatot csepegtetünk a sérült bőrre, összekeverjük a kiálló szövetfolyadékkal, és Pasteur pipettával vagy hasonló eldobható steril eszközzel összegyűjtjük egy kémcsőben a folyékony dúsítóközeg (epe) egyikével. húsleves, Rapoport táptalaj stb.). A laboratóriumban az oltást 37 °C-on tartják 18-24 órán keresztül, majd sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajon (Endo, EMS, ICA) végezzük az oltást.

13. A csontvelő bakteriológiai vizsgálata

Köztudott, hogy a tífusz diagnózisának laboratóriumi igazolása esetén a leghatékonyabb a csontvelő bakteriológiai vizsgálata (90-95%-os a kórokozó beoltása). Még a tífusz enyhe és kitört formáiban szenvedő, klinikailag nehezen felismerhető betegeknél is, valamint az antimikrobiális gyógyszerek szedésének hátterében is, a mielokultúrák beoltása lényegesen magasabb, mint a vérkultúráké.

A gyakorlatban azonban a csontvelő bakteriológiai vizsgálatát nagyon ritkán, csak különleges alkalmakkor végzik el. klinikai indikációk, a tífusz vagy paratífusz diagnózisát megerősítő egyéb laboratóriumi adatok hiányában, tk. ez az invazív eljárás meglehetősen traumatikus. A kutatáshoz szükséges anyagmintavétel csak kórházban, megfelelő szakember jelenlétében történik.

A bakteriológiai vizsgálathoz szükséges anyagot (aspirátum) 0,50-0,75 ml mennyiségben aszeptikusan a szegycsont (nyél vagy test) átszúrásával nyerjük, és kémcsőbe oltjuk valamelyik dúsító közeggel (epeleves, Rapoport táptalaj stb.).

Ha az aspirátumot a szúrás után nem lehet közvetlenül a dúsító táptalajba oltani, akkor steril csőbe gyűjtjük, és azonnal a laboratóriumba küldjük, ahol a dúsító táptalajba történő beoltást végzik. A laboratóriumban az oltásokat 37 °C-on 18-24 órán át inkubálják, majd sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra oltják.

További kutatásokat végeznek, akárcsak más biológiai anyagok bakteriológiai vizsgálatánál.

14. Tápközeg és reagensek

A bélfertőzések kórokozóinak, különösen az enterobaktériumoknak az izolálására és azonosítására szolgáló tápközegek listája kiterjedt és folyamatosan bővül. A konkrét környezet kiválasztását nagymértékben meghatározzák a helyi gazdasági feltételek és hagyományok. Ezt azonban több alapelvnek kell vezérelnie.

14.1. A táptalaj leírásában jelezni kell, hogy nem csak a Salmonella, hanem a Salmonella Typhi és S. Paratyphi A, B és C kimutatására is használható.

14.2. A jó hírű gyártóktól származó dehidratált tápközeget előnyben kell részesíteni a közvetlenül a laboratóriumban készített táptalajokkal szemben.

14.3. A laboratóriumban lévő táptalaj minden egyes tételét teszttörzsekkel kell ellenőrizni (belső minőségellenőrzés).

14.4. A tífusz és paratífusz betegségek laboratóriumi diagnosztizálására és a baktériumhordozók kimutatására az Orosz Föderáció területén a megállapított eljárásnak megfelelően engedélyezett tápközeget és reagenseket kell használni.

15. Módszerek enzimatikus tulajdonságok vizsgálatára

Jelenleg az Enterobacteriaceae családba tartozó mikroorganizmusok, köztük a tífusz és paratífusz kórokozóinak enzimaktivitásának vizsgálatára különböző hazai és külföldi gyártású diagnosztikai tesztrendszereket fejlesztettek ki, gyártottak és regisztráltak (a legegyszerűbb klasszikus Hiss táptalajtól a kémcsövekben és tányérokban az automatikusig. elemzők). Ha a tesztrendszerek lehetővé teszik egy mikroorganizmus nemzetségi szintű azonosítását és a törzsek enzimaktivitásának jellemzőit, akkor a tífusz és a paratífusz kórokozóinak azonosítására is alkalmasak. A tesztrendszerekkel való munkavégzés menetét a használati utasítás részletezi, és azt szigorúan be kell tartani.

16. A kórokozók biológiai tulajdonságai

A tífusz és az A, B és C paratífusz kórokozói az Enterobacteriaceae családba, a Salmonella nemzetségbe, az enterica fajokba, az I. alfajba (enterica) tartoznak, és az erre az alfajra, fajra, nemzetségre és családra jellemző morfológiai, kulturális és enzimatikus tulajdonságokkal rendelkeznek.

A Salmonella fajok enterica nemzetség képviselői történelmileg kialakult egy olyan helyzet, amikor a szerovariánsokat nem antigénképlet alapján jelölték meg, mint más baktériumoknál, hanem a betegségek (emberi vagy állati) nevével, az országgal, várossal vagy utcával, ahol izolálták őket, stb. Hiba ezeket a fajneveket figyelembe venni, mert nincs taxonómiai állapotuk. A leggyakoribb Salmonella szerovariumok nevei azonban annyira ismerősek, hogy szinte lehetetlen antigénképletekkel helyettesíteni őket. Ezért a modern Kaufman-White sémában a Salmonella enterica I. alfaj megjelölésénél a fajmegjelölés helyett a szerovariáns nevét használják, de nagybetűvel írják.

Így a tífusz és a paratífusz kórokozóinak teljes neve a következő:

Salmonella enterica subsp. enterica szerovar Typhi;

Salmonella enterica subsp. enterica szerovar Paratyphi A;

Salmonella enterica subsp. enterica szerovar Paratyphi B;

Salmonella enterica subsp. enterica szerovar Paratyphi C

Az általános gyakorlatban a nevek rövidített változatai is használhatók:

Salmonella ser. Typhi vagy Salmonella Typhi vagy S. Typhi;

Salmonella ser. Paratyphi A vagy Salmonella Paratyphi A vagy S. Paratyphi A;

Salmonella ser. Paratyphi B vagy Salmonella Paratyphi B vagy S. Paratyphi B;

Salmonella ser. Paratyphi C vagy Salmonella Paratyphi C vagy S. Paratyphi C

16.1. Kulturális és morfológiai tulajdonságok

A mobil gram-negatív pálcikák nem képeznek spórákat és kapszulákat, a fakultatív anaerobok jól növekednek közönséges táptalajokon.

Egy egyszerű tápanyag-agaron - a telepek enyhén domborúak, sima széllel és sima felülettel, nedvesek, fénye meghaladja az 1 mm-t.

Differenciáldiagnosztikai táptalajokon (laktózt, mint megkülönböztető anyagot) - átlátszó, színtelen vagy kékes, és néha rózsaszínű vagy színű a telepkörnyezet (Endo, Ploskirev, EMS és más hasonló közegek).

SS-arapé-n közepes színű telepek fekete középponttal.

Bizmut-szulfit táptalajon a S. Typhi, S. Paratyphi B izolált telepei feketék, jellegzetes fémes fényűek, a telep alatti táptalaj feketére festett. A S. Paratyphi A kolóniái zöldesek, a táptalaj világos színűek, érzékenyek.

Az S. Paratyphi B (a paratífusz B kórokozója) törzsei a hús-pepton agaron megemelkedett nyálkahártya falat képezhetnek a telepek perifériáján. A nyálkahártya 2-5 napig fejlődik ki, ha a terményeket szobahőmérsékleten tárolják. Ez a tünet nem állandó és diagnosztikus.

16.2. Enzimatikus tulajdonságok

Az enzimatikus tulajdonságok vizsgálatát szénhidrátok, többértékű alkoholok, aminosavak és egyéb szerves vegyületek csoportjával kapcsolatban végzik, amelyeket a Salmonella és más enterobaktériumok azonosítására és tanulmányozására használnak. A gyakorlati laboratóriumokban általában kis számú vizsgálatot alkalmaznak a bélbaktériumok családjába tartozó fő nemzetségek azonosítására. A Salmonella enzimatikus tulajdonságainak jellemzőit, beleértve a tífusz, valamint a paratífusz A, B és C kórokozóit, a 2. táblázat mutatja be.

2. táblázat

A tífusz és paratífusz A, B, C kórokozóinak enzimatikus tulajdonságai

Ebben az esetben a jobb oldali gombbal megismételheti a dokumentum vásárlását.

Hiba történt

A fizetés technikai hiba miatt nem fejeződött be, készpénz fiókjából
nem írták le. Próbáljon várni néhány percet, és ismételje meg a fizetést.

szubsztrát			S. Paratyphi A
Glükóz (gáz)

5. A baktériumok alapformái

6. Mikroszkópos módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására

7. Egyszerű és összetett színezési módszerek

8. Gram és Ziehl-Neelsen festések mechanizmusa

III. Gyakorlati munkaterv

IV. Példák szituációs feladatokra

2. témakör: Speciális festési módszerek. A biológiai mikroszkóp eszköze. Fajták

I. Kérdések az önálló tanuláshoz:

II. alapszöveg

1. Speciális festési módszerek az egyes bakteriális struktúrák azonosítására

2. Pro- és eukarióta egyes csoportok festési módszerei

3. Mikroorganizmusok mobilitásának vizsgálata

4. A mikroszkópia típusai

5. A biológiai mikroszkóp készüléke

6. Az immerziós mikroszkópos vizsgálat menete

III. Gyakorlati munkaterv

IV. Példák szituációs feladatokra

3. témakör: A mikroorganizmusok egyes csoportjainak morfológiája és ultrastruktúrája: rickettsiák, chlamydia, mikoplazmák, aktinomyceták, spirocheták, gombák, protozoák

I. Kérdések az önálló tanuláshoz:

II. alapszöveg

III. Gyakorlati munkaterv

IV. Példák szituációs feladatokra

Elméleti kérdések a tudás határellenőrzéséhez

Gyakorlati készségek listája

ιι modul "A mikroorganizmusok élettana"

I. Kérdések az önálló tanuláshoz:

II. alapszöveg

1. A táptalaj összetétele és követelményei

2. A táptalajok osztályozása

3. Az aszepszis és antiszepszis fogalma

4. A fertőtlenítés fogalma, a fertőtlenítés módszerei és a fertőtlenítés hatékonyságának ellenőrzése

5. A sterilizálás fogalma, a sterilizálás módszerei, berendezései és módjai

6. A sterilizálás hatékonyságának meghatározására szolgáló módszerek

7. A mikroorganizmusok faj, törzs, telep, tiszta kultúra fogalma

8. Módszerek a mikroorganizmusok tiszta kultúráinak izolálására

9. Bakteriológiai módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására

10. Mikroorganizmus-oltási technika

11. Az anaerob baktériumok tenyésztésének jellemzői

III. Gyakorlati munkaterv

IV. Példák szituációs feladatokra

A fertőző betegségek diagnosztizálása.

színpadra állítom.

II szakasz. Cél: tiszta kultúra felhalmozása

III szakasz. Cél: a vizsgált kultúra azonosítása

IV szakasz.

2. témakör: A baktériumok élettana. A baktériumok táplálkozása, légzése, szaporodása, anyagcseréje és enzimrendszerei. Bakteriológiai módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására (2. nap).

I. Kérdések az önálló tanuláshoz:

II. alapszöveg

1. A mikroorganizmusok anyagcseréje

2. Mikroorganizmusok enzimrendszerei

4. A baktériumok táplálkozási mechanizmusai

6. A baktériumok osztályozása a légzés típusa szerint - biológiai oxidáció.

7. Az erjesztés és fajtái

8. A baktériumok tenyésztésének feltételei

9. A baktériumok növekedése és szaporodása. A baktériumok szaporodásának fázisai

10. Bakteriológiai kutatási módszer. Az aerobok izolálására szolgáló bakteriológiai módszer 2. szakaszának elvégzése. A baktériumok kulturális tulajdonságai.

III. Gyakorlati munkaterv

4. Töltse ki a "Mikroorganizmusok osztályozása a légzés típusa szerint" táblázatot

IV. Példák szituációs feladatokra

3. témakör: Tiszta kultúrák azonosítása. A baktériumok biokémiai aktivitása. Bakteriológiai módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására (3 nap).

1. A mikroorganizmusok tiszta kultúráinak izolálására szolgáló bakteriológiai módszer III. szakaszának végrehajtása. Mikroorganizmus azonosítási rendszer

2. Az izolált tenyészet tisztaságának meghatározása

3. A baktériumok enzimatikus aktivitásának felhasználása mikroorganizmusok azonosítására

4. A mikroorganizmusok glikolitikus aktivitásának meghatározására szolgáló módszerek

5. A baktériumok proteolitikus aktivitásának meghatározására szolgáló módszerek

6. Bakteriális redox enzimek meghatározása

7. Rendszerek a baktériumok biokémiai azonosítására

III. Gyakorlati munkaterv

IV. Példák szituációs feladatokra

III. modul "Az antibakteriális kemoterápia alapjai"

2. Az antibiotikumok hatásmechanizmusai mikroorganizmusokra

3. Az antibiotikumok mellékhatásai

4. A mikroorganizmusok antibiotikum rezisztenciájának mechanizmusai

5. A mikroorganizmusok antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározására szolgáló módszerek

III. Gyakorlati munkaterv

IV. Példák szituációs feladatokra

III. modul "Fertőzés és fertőző folyamat"

2. téma: Fertőző folyamat. A baktériumok patogenitásának tényezői. Biológiai módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására

alapszöveg

1. A fertőzés tana. A "fertőzés" és a "fertőző betegség" fogalma

3. A fertőző betegségek osztályozása és fertőzési formák

4. Egy fertőző betegség időszakai és kimenetele

5. Patogenitás és virulencia, virulencia mértékegységei

6. A mikroorganizmusok patogenitásának főbb tényezői

7. Mikrobás toxinok

8. Biológiai módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására

III. Gyakorlati munkaterv

IV. Példák szituációs feladatokra

III. modul „A mikroorganizmusok ökológiája. Az egészségügyi mikrobiológia alapjai »

3. témakör: Az emberi szervezet mikroflórája. Víz, levegő, talaj egészségügyi és bakteriológiai vizsgálata

I. Kérdések az önálló tanuláshoz:

II.Alapszöveg

2. Az emberi szervezet normál mikroflórájának funkciói

3. Az emberi szervezet mikroflórájának meghatározására szolgáló módszerek

4. A dysbacteriosis fogalmának meghatározása és előfordulásának okai

5. A dysbacteriosis diagnózisának és kezelésének elvei

6. Az egészségügyi mikrobiológia tantárgy és az egészségügyi indikatív mikroorganizmusokra vonatkozó követelmények

7. A víz, a levegő és a talaj mikroflórája

8. Módszerek a víz, a levegő és a talaj egészségügyi indikatív mikroorganizmusainak meghatározására

III. Gyakorlati munkaterv

IV. Példák szituációs feladatokra

Elméleti kérdések a tudás határellenőrzéséhez

Gyakorlati készségek listája

Irodalom

9. Bakteriológiai módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására

A mikrobiológiai diagnosztika fő módszere és a mikrobiológia "arany standardja" a bakteriológiai módszer.

A bakteriológiai módszer célja a kórokozó tiszta tenyészetének izolálása a vizsgált anyagból, a tiszta tenyészet felhalmozása és a tenyészet azonosítása a következő tulajdonságok összessége alapján: morfológiai, színezési, kulturális, biokémiai, antigén, a patogenitás és a toxicitási tényezők jelenléte alapján, valamint az érzékenység meghatározása antimikrobiális gyógyszerekre és bakteriofágokra.

A bakteriológiai kutatási módszer a következőket tartalmazza:

1. a vizsgálati anyag beoltása táptalajba

2. tisztakultúrás izoláció

3. mikroorganizmusok azonosítása (fajhoz tartozás meghatározása).

Aerob és an. tiszta kultúrák izolálása és azonosítása aerob baktériumok a következő tanulmányokat írja elő:

I. szakasz (munka natív anyagokkal)

Cél: izolált telepek előállítása

1. Az előzetes mikroszkópos vizsgálat hozzávetőleges képet ad a mikroflóráról

2. Kutatási anyag elkészítése

3. Sűrű táptalajra vetés izolált telepek kinyerésére

4. Inkubálás optimális hőmérsékleten, leggyakrabban 37°C-on, 18-24 óráig

II szakasz

Cél: tiszta kultúra megszerzése

1. Kolóniák makroszkópos vizsgálata áteresztett és visszavert fényben (a telepek méretének, alakjának, színének, átlátszóságának, konzisztenciájának, szerkezetének, kontúrjának, felületének jellemzése).

2. Izolált telepek mikroszkópos vizsgálata

3. Aerotolerancia vizsgálata (a vizsgált anyagban a szigorú anaerobok jelenlétének megerősítésére).

4. Egy-egy fajra jellemző telepek vetése tiszta tenyésztő táptalajra vagy elektív táptalajra és inkubálás optimális körülmények között.

szakasz III

Cél: izolált tiszta kultúra azonosítása

1. Az izolált tenyészet biológiai tulajdonságok komplexe alapján történő azonosításához a következőket tanulmányozzuk:

morfológia és színárnyalati tulajdonságok

kulturális tulajdonságok (a tápközegen történő növekedés jellege)

biokémiai tulajdonságok (a mikroorganizmusok enzimaktivitása)

szerológiai tulajdonságok (antigén)

virulens tulajdonságok (patogenitási faktorok termelésének képessége: toxinok, enzimek, védekezési és agressziós faktorok)

patogenitás állatokra

fág lizabilitás (érzékenység a diagnosztikai bakteriofágokra)

antibiotikumokra való érzékenység

egyéb egyedi ingatlanok

IV. szakasz (Következtetés)

A vizsgált tulajdonságok alapján következtetést vonunk le az izolált tenyészetről

A kutatás első szakasza. A kóros anyag vizsgálata mikroszkóppal kezdődik. A megfestett natív anyag mikroszkópos vizsgálata lehetővé teszi a vizsgált objektum mikrobiális tájképének összetételének, a mikroorganizmusok egyes morfológiai jellemzőinek közelítő megállapítását. A natív anyag mikroszkópos vizsgálatának eredményei nagymértékben meghatározzák a további kutatások menetét, majd ezeket összevetjük a táptalajon végzett oltás során kapott adatokkal.

Ha a mintában elegendő kórokozó mikroorganizmus van, az oltást sűrű tápközegen végezzük (izolált telepek létrehozása érdekében). Ha kevés baktérium van a vizsgált anyagban, akkor az oltást folyékony tápanyag-dúsító tápközegen végezzük. A tápközeget a mikroorganizmusok igényei szerint választják ki.

A mikroorganizmusok tenyésztése csak akkor lehetséges, ha optimális feltételeket teremtenek létfontosságú tevékenységükhöz, és betartják azokat a szabályokat, amelyek kizárják a vizsgált anyag szennyeződését (idegen mikrobákkal való véletlen szennyeződés). Kémcsőben, lombikban vagy Petri-csészében olyan mesterséges körülményeket lehet létrehozni, amelyek kizárják a tenyészet más fajok általi szennyeződését. Minden edénynek és tápközegnek sterilnek kell lennie, és a mikrobiális anyag beoltása után védve kell lennie a külső szennyeződésektől, ami dugókkal vagy fémkupakokkal és fedőkkel történik. A vizsgálati anyaggal végzett manipulációkat alkohollámpa lángzónájában kell elvégezni, hogy kizárjuk az anyag külső környezetből való szennyeződését, valamint a biztonsági előírások betartása érdekében.

Az anyag táptalajra történő beoltását legkésőbb a begyűjtéstől számított 2 órán belül meg kell tenni.

A kutatás második szakasza. Kolóniák vizsgálata és tiszta kultúrák izolálása. Egy napos inkubáció után a telepek nőnek a lemezeken, és az első löketnél a növekedés folyamatos, a következőben pedig izolált telepek. A kolónia ugyanazon fajhoz tartozó mikrobák gyűjteménye, amelyek egyetlen sejtből nőttek ki. Mivel az anyag legtöbbször mikrobák keveréke, többféle kolónia nő. A különböző kolóniákat ceruzával megjelöljük, a fenék oldaláról körvonallal körvonalazzuk, és tanulmányozzuk őket (11. táblázat). Mindenekelőtt szabad szemmel tanulmányozza a kolóniákat: makroszkópikus jeleket. Az edényt áteresztő fényben (nyitás nélkül) alulról nézzük, a telepek átlátszóságát feljegyezzük (átlátszó, ha nem zárja be a fényt; áttetsző, ha részben megfogja a fényt; átlátszatlan, ha nem megy át a fény a telepet), mérje meg (mm-ben) a telepek méretét. Ezután a fedél oldaláról tanulmányozzák a telepeket, megjegyzik a formát (szabályos kerek, szabálytalan, lapos, domború), a felület jellegét (sima, fényes, fénytelen, érdes, ráncos, nedves, száraz, nyálkás), színét. (színtelen, színes).

11. táblázat A telepek vizsgálatának sémája

		Lehetséges telepjellemzők
		Lapos, domború, kupola alakú, süllyesztett, kerek, rozetta alakú, csillag alakú
	Méret, mm	Nagy (4-5 mm), közepes (2-4 mm), kicsi (1-2 mm), törpe (< 1 мм)
	Felszíni természet	Sima (S-alakú), érdes (R-alakú),nyálkás (M-alakú), csíkos, göröngyös, matt, fényes
		Színtelen, festett
	Átláthatóság	Átlátszó, átlátszatlan, áttetsző
	Az élek természete	Sima, fogazott, rojtos, rostos, csipkés
	Belső szerkezet	Homogén, szemcsés, heterogén
	Következetesség	Viszkózus, nyálkás, omlós
	Emulgeálás egy csepp vízben	Jó Rossz

Megjegyzés: 5-7 pontot vizsgálunk a mikroszkóp kis nagyításával.

A kolóniák közötti különbséget még jobban láthatja, ha rájuk nagyít. Ehhez egy zárt edényt fejjel lefelé helyezünk egy tárgyasztalra, a kondenzátort kissé leengedjük, az objektívet kis nagyítással (x8) alkalmazzuk, mozgatjuk az edényt, mikroszkopikus jeleket tanulmányozunk a telepeken: széle (sima, hullámos, fogazott, csipkés), szerkezete (homogén, szemcsés, rostos, homogén vagy középen és a perem mentén eltérő).

Ezután a kolóniákból származó mikrobiális sejtek morfológiáját tanulmányozzuk. Ehhez a megjelölt telepek egy-egy részéből kenetet készítenek, Gram szerint megfestve. Kolóniák felvételénél ügyeljünk az állagra (száraz, ha a telep morzsolódik és nehezen szedhető; puha, ha hurkon könnyen felveszi; nyálkás, ha a telep a hurok felé nyúl; kemény, ha a telep része nem veszi be a hurok, csak a teljes kolónia távolítható el) .

A kenetek megtekintésekor megállapítható, hogy a telepet egyfajta mikroba képviseli, ezért tiszta baktériumkultúrák izolálhatók. Ehhez a vizsgált telepekről ferde agaron történik az újravetés. Kolóniákból történő újravetéskor ügyelni kell arra, hogy pontosan a kívánt telepeket vegyük ki, anélkül, hogy a közeli telepek hurkát érintenék. A csöveket aláíratjuk és termosztátban 37 °C-on 24 órán át inkubáljuk.

A kutatás harmadik szakasza. Az izolált kultúra azonosítása. Mikrobák azonosítása - az anyagból izolált tenyészet szisztematikus helyzetének meghatározása a fajra és változatra. Az azonosítás megbízhatóságának első feltétele a kultúra feltétlen tisztasága. A mikrobák azonosítására egy sor jelet használnak: morfológiai (alak, méret, flagellák, kapszulák, spórák jelenléte, relatív helyzet a kenetben), tinctoriális (kapcsolat a Gram-festéssel vagy más módszerekkel), kémiai (guanin + citozin arány DNS molekula), kulturális (tápanyagszükséglet, tenyésztési körülmények, növekedési sebesség és természet különböző táptalajokon), enzimatikus (hasadás különféle anyagok közbenső és végtermékek képződésével), szerológiai (antigén szerkezet, specificitás), biológiai (virulencia állatokra, toxicitás, allergenitás, antibiotikumok hatása stb.).

A biokémiai differenciálódáshoz a baktériumok szénhidrát fermentációs képessége közbenső és végtermékek, a fehérjék és peptonok lebontásának képessége, valamint a redox enzimek tanulmányozása.

A szacharolitikus enzimek vizsgálatához az izolált tenyészeteket kémcsövekbe inokulálják félfolyékony, laktózt, glükózt és más szénhidrátokat tartalmazó tápközeggel. többértékű alkoholok. Félig folyékony táptalajokon az oltást a táptalaj mélyére történő injektálással végezzük. Injekciós vetésnél a kémcsövet a táptalajjal ferdén tartják, a dugót eltávolítják, a kémcső szélét megégetik. Steril hurokkal felvesszük az anyagot, és szinte az aljáig átszúrunk vele egy tápközeg oszlopot.

A proteolitikus enzimek meghatározásához az izolált tenyészetet peptonvízzel vagy MPB-vel oltjuk be. Ehhez vesznek egy kémcsövet az oltással közelebb magukhoz, és egy kémcsövet a tápközeggel - távolabb maguktól. Mindkét kémcsövet egyszerre nyitjuk ki, a dugójukat a kisujjal és a tenyér szélével rögzítjük, a kémcsövek széleit megégetjük, kalcinált hűtött hurokkal befogunk egy kis tenyészetet és átvisszük a második kémcsőbe, eldörzsöljük. folyékony közeget a kémcső falára és a táptalajjal lemossuk.

A vetésnél és az újravetésnél ügyelni kell a sterilitás szabályainak betartására, hogy ne szennyezzék be termésüket idegen mikroflórával, és ne szennyezzék a környezetet. A csöveket felcímkézzük és termosztátba helyezzük, hogy egy napig 37 °C-on inkubáljuk.

Következtetés

Az eredmények elszámolása. Kutatási következtetés. Az azonosítás eredményeit figyelembe veszik, és a kapott adatok összessége alapján, a kézikönyvben leírt típustörzsek osztályozása és jellemzői alapján (Bergy útmutatója, 1994-1996) meghatározzák az izolált tenyészetek típusát.

"

Kulturális módszer-tiszta kultúra kiürülése és felhalmozódása-th az utolsó. Azonosító.Néhány.tartály-és ellenállási terület, így a tartály.elemzés tartalmazhatja az érzékenység meghatározását. Pure-to-ry a \ b

Funkció: többlépcsős. Mínusz - időtartam.

Kutasson jól: vér, vizelet, gerincvelői folyadék nyálka a torokból és az orrból, széklet

Izoláláshoz használjunk sűrű táptalajt Lépések: tiszta tenyészet izolálása

Előosztályozási módszerek:

1) baktériumkolóniák és jellemzőik morfológiai elemzése speciális \ differenciális táptalajokon

2) mikroszkóp - megfestettem a tartályt

A tartály végleges azonosításához: b \ x vizsgálat (biotipizálás);

detektortartály Ag (e szerotípus) -1) r-tion agglutináció üvegen-pr. enterobaktériumokhoz

2) immundiff agarban (corinebac-ii diftéria)

def-e érzékenység a bakteriofágokra (e fág típus)

IMMUNOLÓGIA

Antigén-felismerő receptorok a limfocitákon.

A BCR és a TCR összehasonlító jellemzői

B sejt receptor (BCR)			T-sejt receptor (TCR)
1. Szerkezet
Membrán IgM (mIgM) ritkábban IgD monomer egy további hidrofób doménnel a plazmamembránhoz való rögzítéshez (a 2 paratóp specifitása megegyezik a szekretált antitesteké)	Heterodimer, 2 glikopeptid láncból áll - α és β (diszulfidkötéssel kapcsolódik). Mindegyik 2 funkcionálisan különböző részből áll - változóés állandó Mindkét lánc változó régiói (domainjei). forma antigénkötő központ TCR (CDR 1-3 paratóp). Az α,β láncok állandó fragmentumai biztosítják rögzítés TCR a plazmamembránon és kostimuláló molekulákkal érintkezik
2. Az antigén jel amplifikációs mechanizmusa funkcionálisan attól függ
CD79aés CD79b		A TCR-láncok csak CD3-mal együtt expresszálódnak a sejtmembránon
Még a szabad antigén vagy MHC-protein komplex felismerése és megkötése után sem áll rendelkezésre elegendő jel a limfociták aktiválásához. További molekulákkal való kölcsönhatás szükséges. Citoplazmatikus fragmenseik intracelluláris enzimekkel (tirozin-kinázokkal) kapcsolódnak, amelyek aktiválása génexpresszióhoz vezető kaszkádot indít el. Ez indukálja a naiv sejtek proliferációját és differenciálódását effektor- és memóriasejtekké.
A naiv limfociták receptor komplexuma
BCR komplex = mIgM+CD79a+CD79b		TCR komplex = TCR+CD3+CD4/8
3. Kiválasztó forma jelenléte
Igen (szabad immunglobulin pentamer)		Nem (nem választódik ki extracellulárisan)
4. Antigén felismerési mechanizmus (fő jellemzője)!!!
Felismerni egy epitópot közvetlenül "közvetítők nélkül"		Ingyenes epitópok nem észlelték A kettős elismerés elve Csak molekulával kombinálvaMHC a saját agráripari komplexuma felszínén HLA korlátozott(lásd lejjebb)
5. Változás az immunogenezis lefolyásában
1. A receptor izotípusának változása a IgG, IgA és IgE, a szekretált antitestek osztályának váltása következtében (azaz egy rövid IgM-kitörés után az IgG antitestek kezdenek dominálni). Az antigénnel való ismételt érintkezéskor kezdettől fogva az IgG antitestek dominálnak, mivel a memóriasejtekben a receptorokat kezdettől fogva főleg IgG molekulák képviselik. 2. Fokozott affinitás		1. Nincs változás, stabil izotípus 2. Az affinitás állandó
6. Hasonlóság: az antigénre való érzékenység által klónozva (antigén epitópok felismerése) Minden limfocitának vannak receptorai egy sajátosság(egy idiotípus, azaz V-domének klónozzák) i.e. különböznek abban, hogy a limfociták különböző antigénekre reagálnak

2. A „klónozás” fogalma az immunológiában a következőket jelenti:

1. Az egyes B/T-limfociták azon képessége, hogy egyetlen antigénre (epitópra) reagáljanak. 2. Az egyes B/T-limfociták azon képessége, hogy több epitópra reagáljanak. 3. Az antigén peptidek szelektív kötődése antigénprezentáló sejtek HLA molekulái által. négy. A limfociták antigén-felismerő receptorainak specificitása (epitóp komplementaritása). 5. A T és B limfociták CD fenotípusának klonospecifitása.

A limfociták heterogének azon képességükben, hogy felismerik az antigéneket és reagálnak azokkal. Ezenkívül minden limfocita és utóda (klónja) egyetlen antigénnel (pontosabban egy epitóppal) való kölcsönhatásra van hangolva. Más szóval, a limfociták klónozása az antigénekkel szembeni érzékenység alapján történik, és ez határozza meg az immunválasz szelektivitását (antigénspecificitását). A klónozás molekuláris alapja az antigéneket megkötő receptorok specifitása: minden klón receptora egyedi, csak egy antigénnel reagál. Ez azt jelenti, hogy a klónok és a vonalspecifikus receptorok számának óriásinak kell lennie, ami végtelen számú potenciális antigénnek felel meg. Az antigénnel való találkozás előtt minden klónt kis számú érett nyugvó sejt képvisel (ezeket "naivnak" nevezik). A komplementer receptorokhoz kötődve az antigén biztosítja a limfocita aktiválását, amely szelekciós faktorként működik (klónszelekció). A klón száma növekszik (a klón expanziója), és az azt alkotó limfociták effektor sejtekké és memóriasejtekké differenciálódnak.

BAKTERIOLÓGIA

3. A Mycobacterium tuberculosis jelei a sejtfaluk jellemzőivel kapcsolatban:

1. Savállóság. 2. Lassú szaporodási sebesség. 3. Fagocitákkal szembeni rezisztencia. 4. Stabilitás a külső környezetben. 5. Nagy érzékenység az antibiotikumokra.

TUBERKULÓZIS. nemzetség Mycobacterium Általános tulajdonság - sav-, alkohol- és lúgállóság. család Mycobacteriaceae (saprofita) osztály Firmicutes. Nem mozgékony, aerob gr + pálcika alakú baktériumok. Néha micéliumra emlékeztető struktúrákat alkotnak, innen ered a név. A festéshez a Ziehl-Neelsen módszert alkalmazzuk. A betegséget 3 féle mikobaktérium okozza: Mycobacterium tuberculosis - emberi faj, Mycobacterium bovis - szarvasmarhafaj, Mycobacterium africanum - köztes faj. [A mikobakteriális antroponózisok kórokozói: M.leprae, m.tuberculosis. mycobacterialis zoonosis kórokozója: M.bovis.] rezervoár - beteg, fertőzés útja - aerogén. Az előfordulás megnövekszik a rossz higiénia stb. miatt. A Koch pálca vékony, egyenes vagy enyhén ívelt, hajlamos az elágazásra. A Ziehl-Neelsen módszer vörösre fest, sav szemcséket tartalmaz (légyszemek a citoplazmában), növekedési faktorok szükségesek. Folyékony közegben szintetizálja a zsinórfaktort, a virulenciafaktort. Sok nikotinsavat szintetizál - niacin (niacin vizsgálati módszer differn mikobakt). Sejtfal lipidek: mikolsavak, zsinórfaktor, mikozidok, szulfatidok. Ezért saválló, "páncélozott szörnyeteg". fagocitákkal szembeni rezisztencia. stabil a környezetben. Az antifagocita aktivitás tényezői: sejtfali lipidek, szideroforok.

Patogenezis: behatolás az alveolusokba; szaporodás alveoláris makrofágokban (a fagoszóma-lizoszóma fúzió zsinórfaktor gátlása); nem specifikus preimmun granuloma kialakulása (makrofágból a fertőzött sejtek körül kialakuló szár); a baktériumok behatolása a regionális nyirokcsomókba; T-sejtes immunitás kiváltása; A makrofágok T-függő aktiválása (először a Thelp, a fertőzött makrofágok biociditásának növelése, majd a Tkil, a makrofágok fertőzésének elpusztítása); specifikus posztimmun granuloma kialakulása. A folyamat befejezése - fibrózis, meszesedés, látens fertőzések kialakulása, az exogén újrafertőződés elleni immunitás formái. [A folyamat beindítása - intramakrofág invázió. Mechanizmusok: nem agresszív fagocitózis, képződés visszaszorítása fagolízissel, aktív ellenállás a fagolizoszómák biotoxikus faktoraival, a makrofágok és a T-limfociták funkcionális együttműködésének elnyomása.] Primer tuberkulózis-előny gyermekkori manifesztációban (+ feb hőmérséklet) - - Primer immunkomplex Gon fókuszában. A granulomában Pirogov-Lnghans sejtek vannak, a kerület mentén - limfociták, mononukleáris sejtek. Endogén inf (szekunder tubus) vagy exogén reaktiválódása lehetséges, reinfekció ritka, tuberkuloprotein-allergia hátterében alakul ki, immunhiányos egyénekben disszeminált tuberkulózis lehetséges. A tuberkulin az allergiadiagnosztikában használt tuberkuloproteinek (fehérjeszármazékok) komplexe. [Freund-adjuvánst használnak: peptidoglikán + sejtfallipidek]. A tuberkuloproteinek immunológiailag függő patogenitásúak, részt vesznek a védő immunitás megvalósításában, és allergiadiagnosztikában használják őket. Sejtfallipidek: antimakrofág aktivitás, adjuvánsként részt vesznek a T-sejt immunitás kiváltásában, meghatározzák a baktériumok tenyésztési és tinctoriális jellemzőit. A makrofágok fő funkciója a zónában nem specifikus granuloma: sejtes immunitás reakcióinak gerjesztése. Posztimmun granuloma: a tuberkuloproteinekkel szembeni késleltetett típusú túlérzékenységi reakció hátterében alakul ki, a makrofágok és a T-effektorok funkcionális együttműködésének zónája, a destruktív reakciók alapja, a sanogenezis (gyógyulás) alapja, a betegség tünetmentes fennmaradásával végződik. a kórokozó. A tuberkulózis pusztító folyamatait a következők határozzák meg: a mycobacter AG immunológiailag közvetített hatásai, a makrofágok citokinfüggő aktivációja, a tuberkuloproteinek allergiája. Immunitás Tuberkulózis elleni immunitás nem steril fertőző, [a mikobaktériumok L-formáinak a szervezetben való jelenléte miatt.] sejtes, antibakteriális

Laboratóriumi diagnosztika A kötelező vizsgálati módszerek közé tartozik a bakterioszkópos, bakteriológiai vizsgálat, biológiai teszt, tuberkulindiagnosztika, a szervezet tuberkulinnal szembeni túlérzékenységének megállapítása alapján (a fehérjekeveréket tuberkulin tisztítja). Gyakrabban fertőzés kimutatására és allergiás reakciók végezzen intradermális Mantoux-tesztet tisztított tuberkulinnal standard hígításban (14 évig). Fluorográfia. Kezelés-antibiotikum terápia, a sebész beavatkozik.

A specifikus profilaxist élő attenuir vakcina - BCG (BCG) - intradermális beadásával végezzük a gyermek születése utáni 5. napon. Az ezt követő újraoltásokat 7, 13 évig végezzük.

VIROLÓGIA

4. Orthomixovírusok hemagglutininje:

1. Beindítja a vírus kölcsönhatását a sejttel. 2. Korlátozott proteolízis után válik aktívvá. 3. Összevonási tényező. 4. Védő antigén. 6. Az Influenza nemzetség minden típusában (fajában) elérhető.

Orthomyxovírusok Az orthomixoviridae családba tartozó influenzavírus nemzetség (nyálka, mucinaffinitással rendelkezők). 3 típusa van - A, B, C. "-" RNS (8 szegmens, egyszálú az A és B, 7 a C) Az ilyen szegmentáció lehetővé teszi, hogy két vírus könnyen cseréljen genetikai információt interakció során, és ezáltal hozzájárul a nagy variabilitáshoz a vírus., helikális nukleokapszid (RNS-ből, nukleoproteinből (szerkezetek és szabályozzák a szerepét és típus-specifikus ag) és fehérje), szuperkapszid-is (= "komplex"). Az RNS polimeráz komplex fehérjéi (enzimei): PB1 fehérje (transzkriptáz), PB2 fehérje (endonukleáz), PA fehérje (replikáz). Következik az M-protein (a vírusrészecskék összeállításában részt vesz, típusspecifikus AG), majd a bilipid réteg (korábban a gazdasejt membránjából, az éter iránti érzés), amelyből a glikoprotein kiugrik, amely hemagglutininből áll (H). ) és a neurominidáz (N (a C típus nem))

AG szerkezete: belső - NP, protein-M, az RNS polimeráz komplex fehérjéi. Külső - H (15-ös változat, emberben: H1-3) és N (9, emberben: N1, N2). Replikáció h/z mRNS.

(transzkriptáz, endonukleáz, replikáz). Repl a magban és a szintézisben

A hz H endocitózisával az endoszómába, ott a savas környezet megváltoztatja a konformációt, szabaddá teszi a peptideket (F-fehérjéket), ami a vírus és a fagolizoszomális membrán fúzióját okozza => deproténizáció

Sodródás, váltás. virémia. Remantadin.

Jelei: -RNS (=> nem tudja ellátni az mRNS funkcióit transzkripció nélkül, fragmentáris), héj (belső között M-protein, nukleoprote, ferm polimer készlet), akut légúti fertőzések gerjesztése, nukleokapszid helix sim. Típusokra osztva: (A, B, C) AG-belső fehérjék (nukleoprotein) fajai. Az A, B, C különbözik: ökológus, az AH-izmus léptéke, a virionfarmok spektruma, az Epidem-ti lépés (a kórokozók éllovasa az A típusú vírus, a B típus közepes, a C típus a kórokozók okozója. szórványos járványok). Supercaps fehérjék: N, H. H: a vir és a CL kölcsönhatás beindítása (a TK affinitása szialilált glikopeptidekhez és glikolipidekhez van ennek köszönhetően, a virionok a plazmamembránokon rögzülnek), proteolízissel aktiválódik (szintézis A prekurzor macska módszer reagál egy vényköteles sejttel, de nem biztosítja az obolo virion fúzióját a membránsejtekkel => korlátozott proteolízisen kell átesni, a proteázok a hemaglutot H1-re és H2-re hasítják, majd az endoszómák savas környezetében történő további konformáció után a H2 elindítja a fúzió), f-r fúzió (a nuklekapszid citoplazmába való kibocsátásának módja: az endoszómák savas környezetében speciális szerkezetű hemaglut (fúziós helyek) macska gerjeszthető kombinált vírus- és sejtmembránok), Protect-AG (blokkolják a vírust és elnyomják a fertőzést), az influenza minden típusában sziálsav lehasadása glikolipidekről és glikopeptidekről, amelyek lényegében inaktiválják a hemagglutinin receptorait), az epitóp különbségek változóak. AG-eltolás (ez egy váltás, váratlan, hirtelen macska az antigén teljes megváltozásához vezet profil H,Nés új altípusok jelentek meg: csak A típus, ökológiai determináns-n (vírusok kötődése a légutakhoz), genetikai determináns (a gének genetikai rekombinációjától függ, ha a sejteket egyszerre több törzzsel fertőzik), a virion altípusainak változása protein pov, pandémiás (H1N1 (ez spanyol) H3N2 (Hong Kong vírus). get: AG-change, drift.

Vizsgajegy 58.

ÁLTALÁNOS MIKROBIOLÓGIA

A koncepció specifikus megelőzés fertőző betegségek. Az oltás immunológiai alapjai. E Jenner és L. Pasteur művei. A vakcinák típusai (elölt, élő, alegység; mono- és társult). Rekombináns vakcinák, a beszerzés elve. konjugált vakcinák. Nyálkahártya elleni védőoltások.

Az immunitás passzív (1. fertőzés után természetes úton szerzett és 2. oltás után szerzett művészet) és aktív (1. anya AT-je természetes úton, tejen vagy méhlepényen keresztül és 2. szeroterápiával szerzett művészet). A nem specifikus prof-ka a fertőzés elkerülését célozza, a specifikus pedig a konkrét gerjesztés ellen irányul. Az oltás lényege, hogy emléket alakítsunk ki a magas vérnyomásról, ami gyors immunválaszt biztosít. A vakcinához csak védőantigénekre van szükség (azaz antitestek termelését okozó)

TÖRTÉNELEM: 1778-ban Jenner bebizonyította, hogy a "tehénhimlő" oltás megvéd a himlővel szemben. Puszta kísérletezés eredménye volt. Ez a vakcinológia születési dátuma. A "vakcina" kifejezést Pasteur találta ki. 1881-ben „szándékosan” gyengítette a baktériumok virulenciáját azzal, hogy kedvezőtlen körülmények között tenyésztette őket. Ő készítette el az első vakcinákat a csirke kolera és az lépfene ellen. 885-ben kapott besh-wa elleni oltást (később kiderült, hogy elölt vakcina volt)

A vakcinák típusai:

1. ÉLŐ - legyengített (gyengített) baktériumok bevezetése. Osl-t fizikai, kémiai módszerek. "+" - magas immunogenitás és a hatás időtartama (mivel a legyengült baktériumok képesek terjeszkedni az org-me-ben, fennmaradnak "-" - fokozott reaktogenitás, instabilitás, elhanyagolható. De a virulens fenotípus visszafordulásának valószínűsége. Példa: BCG

2. KILLED-Sod-t inaktivált baktérium, prost, gombák vagy virionok. Hátrányaik és előnyeik ellentétesek az élő vakcinákkal. Gyakrabban kell elvégezni. Példa: n-influenza, hasi tífusz

3. ALEGYSÉG - tisztított védőantigénekből áll. A reaktivitás minimális. O alacsony immunogenitás adjuvánsok segítségével fokozva

1) Konjugált - isp-t imm-that létrehozására T-független AG ellen. A T-független AG nem hagy memóriát.

2) Anatoxinok – baktériumok semlegesített toxinjai. A probléma az, hogy a monointoxicitás ritka. Az exotoxinokat formalinnal kezelik, és elvesztik mérgező tulajdonságaikat, de immunitásuk megmarad. Nem védenek a baktériumok ellen. Példa: tetanusz toxoid

3) Rekombináns - ezek baktériumplazmidok alapján készült rekombináns DNS-molekulák, amelyekbe a védőantigének génjeit inszertálják. Az ilyen DNS szintetizátor-t AG, amely humorális és celluláris imm.

1) Csupaszítjuk szabad plazmidok vagy műhordozókra adszorbeált plazmidok felhasználásával. Biztonságban vannak. Példa: Hepatitis B

2)Vector - szállításhoz használjon legyengített bactot

4. MUCOSALE - kifejezetten imm-that nyálkahártyák számára készült a légúti, bél- és nemi szervek fertőzései ellen. Pomiso d-I a helyszínen, ezek is befolyásolják a teljes imm-t. Feltétlenül sopr-t adjuvánsaik. De a gyakorlatba való bevezetésük nagyon lassú.

Bakteriológiai kutatási módszer. Aerob baktériumok tiszta kultúrájának izolálása (1-2 szakasz)

1. A bakteriológiai módszer lényege

3. Módszerek izolált telepek előállítására

4. Módszerek tiszta tenyészet előállítására

1. Végezze el az elsődleges vetést Koch és Drygalski módszerrel

2. Izoláljunk tiszta tenyészetet

Munkaterv:

1. Bakteriológiai kutatási módszer

2. A bakteriológiai módszer szakaszai

3. Fogalom: tiszta kultúra, törzs, telep

4. Módszerek izolált telepek előállítására

5. Módszerek aerob baktériumok tiszta tenyészetének előállítására

A fertőző betegségek laboratóriumi diagnosztizálásának fő módszere a bakteriológiai módszer. A bakteriológiai módszer lényege a kórokozók izolálása a vizsgált anyagból és annak azonosítása (nemzetség, faj, fajták meghatározása).

A bakteriológiai módszer lehetővé teszi a következők meghatározását:

1. A kórokozó típusa és a betegség diagnózisa

2. Antibiotikumok, amelyek elpusztítják a kórokozót és előírják a megfelelő kezelést

3. A kórokozó fagovárai és szerovariumai a fertőzés forrásának azonosítására

Az első szakasz a vizsgálati anyag elsődleges beoltása, hogy izolált telepeket kapjunk. Az elsődleges vetés adathordozón és DDS-en (csészék) történik.

A második lépés az izolált telepek jellemzése és tiszta tenyészet előállítása belőlük a fő táptalaj ferde oszlopára történő újraoltással.

A harmadik szakasz a tiszta kultúra azonosítása - a kórokozó nemzetségének, fajainak, fajtáinak meghatározása, antibiotikum érzékenység meghatározása, fagovarok meghatározása.

A mikroorganizmusok kultúrája tápközegen tenyésztett baktériumok. A tiszta kultúra a tápközegen tenyésztett baktériumok egyik fajtája. Egy fajon belül vannak olyan fajták, amelyek egy tulajdonságban különböznek egymástól:

1. Morfovarok - morfológiában különböznek

2. Kemovarok - különböznek a biokémiai tulajdonságokban

3. Szerovariánsok - különböznek az antigén tulajdonságokban

4. Fagovarok - különböznek a fágokkal szembeni érzékenységükben

Tiszta tenyészet szükséges az azonosításhoz, a szerovarok, fagovarok, antibiotikum-érzékenység meghatározásához. A törzs egy adott forrásból (Volga folyó, beteg Ivanov stb.) izolált baktériumfaj. Kolónia - az azonos fajba tartozó baktériumok látható felhalmozódása, amely egy baktériumsejt reprodukciója során képződik sűrű táptalajon.

A vizsgálat első szakasza a vizsgálati anyag elsődleges beoltása, hogy izolált telepeket kapjunk. A kezdeti beoltás előtt a vizsgálati anyagot mikroszkóppal vizsgálják. A vizsgálati anyag általában különféle baktériumok keverékét tartalmazza, beleértve a kórokozókat is. A kórokozó izolálásához tápközeg kiválasztásával és speciális vetési módszerek alkalmazásával izolált telepeket (azonos fajba tartozó baktériumokat) kell előállítani.

Két módszer létezik az izolált telepek előállítására:

1. Drygalski módszer

A mikobaktériumok izolálására és azonosítására szolgáló kóros anyag tanulmányozásának bakteriológiai módszere 3 módszert tartalmaz: bakterioszkópos, kulturális és biológiai / R.V. Tkzova, 1983; I. I. Rumachik, 1987, 1993; MINT. Doncsenko, 1989; Yu.Ya. Kassich, 1990; A. Kh. Naimanov, 1993; L. P. Khodun, 1997/. A bakteriológiai vizsgálat időtartama nem haladhatja meg a 3 hónapot.

Figyelembe véve, hogy a makroszkópos tuberkulózisos változások a szervekben és szövetekben egy nagy marha szarvasmarha-tuberkulózis kórokozóját okozza, nincs értelme az ilyen anyagot bakteriológiailag vizsgálni. Ha az ilyen anyagot kutatás céljából a laboratóriumba szállítják, akkor bizottsági ellenőrzést végeznek, és egy aktust készítenek. Az anyag ártalmatlanná válik.

Az anyag bakterioszkópos (mikroszkópos) vizsgálata abból áll, hogy minden szervből (vagy tuberkulózis gyanús elváltozású szervdarabokból) és egy vizsgálatra leadott nyirokcsomót előkészítünk, 2 lenyomat kenetet, levegőn szárítjuk, egy láng fölé rögzítjük. alkohollámpa, Cyl-Nielsen szerinti festés és a megfestett kenetek mikroszkóp alatti megtekintése, minden kenetben legalább 50 látómezővel. Egy hasított testből legalább 20 kenet-lenyomatot kell készíteni az anyagból. Ezenkívül a mikroszkópos keneteket táptalajra vetett anyag szuszpenziójából is készítik.

A kenetek Ziehl-Neelsen festése szelektív a mikobaktériumok kimutatására: a festett szövetek vagy az idegen mikroflóra kék hátterében a mikobaktériumok vörös, rózsaszín vagy rubinvörös pálcikákként jelennek meg. A legjobb, ha binokuláris mikroszkóp alatt nézi a keneteket 1,5 (fúvóka) x 7 (okulár) x 90 vagy 100 (objektív) nagyítással.

A módszert jelzésként használják, mivel a mikobaktériumok jelenléte vagy hiánya a kenetekben egyáltalán nem befolyásolja a lefolyást. további kutatásés még a pozitív bakterioszkópiai következtetésnek sincs jogi jelentősége (kivéve a madarakat). Az anyagot tovább kell vizsgálni.

A madarak tuberkulózisának laboratóriumi diagnózisát megállapítottnak tekintik, ha a vizsgálati anyagból madármikobaktériumot (papagájokból – emberi vagy madárfajokból) izolálnak, pozitív eredmény bioassay, valamint ha mikobaktériumot mutatnak ki a kóros anyagból a mikroszkópos vizsgálat során vett kenetekben (kézikönyv 7.3.2. pont).

Arra is figyelni kell, hogy a lenyomatkenetek elkészítése, rögzítése, megtekintése sok időt vesz igénybe, és nagyon ritkán lehet bennük mikobaktériumot kimutatni, még magozott anyagszuszpenzióból származó kenetekben is. Ezért annak érdekében, hogy munkaidőt és pénzt takarítsunk meg a vágás során nem változott állatokból származó anyagok tanulmányozása során, ajánlatos csak a táptalajra vetett szuszpenzióból származó kenet készítésére és megtekintésére szorítkozni. Ez nem okoz kárt a tuberkulózis diagnózisában, mert az anyag vizsgálata tovább folytatódik.

A hagyományos fénymikroszkópia mellett fluoreszcens mikroszkópia is használható. A keneteket ugyanúgy készítjük el, rögzítjük és fluorokrómok keverékével festjük. A megfestett keneteket fluoreszcens mikroszkóp alatt nézzük. A módszer érzékenyebb, de kevésbé specifikus, ezért nem túl elfogadható, különösen a gyakorlati laboratóriumokban.

A mikobaktériumok kulturális izolálása táptalajokon az egyik fontos láncszem laboratóriumi diagnosztika tuberkulózis a jelenlegi stádiumban. Az első 2-3 hétben azonban a táptalaj, amelyre az anyagot vetettük (5-10 csőre az utasításoknak megfelelően), általában részleges vagy teljes csírázással rendelkezik, ami az oltás során megsérti a sterilitást. az anyagból. A növényeket éppen akkor dobják ki, amikor a legvalószínűbb az atipikus mikobaktériumok kezdeti növekedése (nem beszélve a tuberkulózis kórokozójának kezdeti növekedésének megnyilvánulásáról, amely még később is növekedést mutat). Ilyen esetekben a mikobaktériumok táptalajokon történő izolálásának kultúrmódszere mechanikusan kiesik. Ez az egyik fő oka annak, hogy az anyag bakteriológiai vizsgálata során negatív eredményeket kapunk. Ennek eredményeként, miután az anyag beoltása után a táptalajokon nem szaporodtak el a mikobaktérium telepek, és a laboratóriumi állatok 3 hónapig életben maradtak, a laboratóriumok standard válasza a következő: „A tuberkulózis kórokozója nem izolált” vagy „ Az anyag tuberkulózisra vonatkozó vizsgálata negatív”. A vizsgálatok eredményei alapján a szarvasmarhák tuberkulinra adott válaszának okát nem állapították meg, és ez jelentős számú, tuberkulinra reagáló állat további indokolatlan levágásához vezet a szarvasmarha-tuberkulózistól mentes telepeken, ami nagy gazdasági kárt okoz, megzavarja az állomány forgalmát és szaporodását.

A fentiek ismeretében előnyben kell részesíteni a mikobaktériumok táptalajon lévő anyagból történő izolálásának kultúrmódszerét, amely a tuberkulózis bakteriológiai diagnózisának leggyengébb láncszeme a körzeti állatorvosi laboratóriumokban.

A mikobaktériumok izolálásának kultúrmódszerének pozitív eredményei főként két körülménytől függenek: a mikobaktériumok anyagból való kioltásának megbízhatóságának növekedésétől és a sterilitási feltételek betartásától a dobozban végzett munka során.

A vizsgálathoz vett anyagból a mikobaktériumok oltásának megbízhatóságának növekedése elsősorban annak minőségi kiválasztásától, a vetés előtti kezeléstől és a vetést végző táptalaj kémcsövek számának növekedésétől függ.

A fő feltételek, amelyek betartása az anyag táptalajra vetésekor garantálja a mikobaktériumok telepek növekedését:

a) a levágott állatokból, amelyek a vágás során nem változtak, bakteriológiai vizsgálatra anyagot kell venni, külön minden tetemről, és minden egyes mintát (az egyes állatokból származó anyagot) 10-20 táptalaj kémcsőbe beoltva az alábbi séma szerint:

A fej nyirokcsomói (submandibularis, garat);

Bronchialis és mediastinalis nyirokcsomók;

Mesenterialis (mesenterialis) nyirokcsomók;

Egyéb nyirokcsomók (ha vannak gyanús területek);

Szervek (szükség esetén is).

Az eredmény egy állatból származó anyag beoltása 30-50 kémcső táptalajra. Ez 3-5-szörösére növeli a mikobaktériumok beoltásának megbízhatóságát, mivel a minták szétválasztása nélkül (az utasításoknak megfelelően) csak 5-10 tápközeg kémcsőbe ajánlott beoltani az anyagot egy két fejből. tanya.

b) Közvetlenül az anyag bakteriológiai beoltása során vágjunk ki a nyirokcsomó vagy szerv zavart morfológiai szerkezetű (hiperplázia, induráció, tűpontos és harántcsíkolt vérzések stb.) darabjait. Ezenkívül ki kell vágni az összes megváltozott területet. Ha egy habarcsban térfogat szerint sok anyag van, akkor két részre osztható.

c) Szigorúan tartsa be a munkavégzés módszertanát, ne sértse meg az anyag feldolgozási és vetési módját.

d) Az anyag, különösen a nyirokcsomók homogenizálása során steril homokot vagy finomra tört steril üveget kell használni. A lehető legjobban őrölje meg az anyagot (krémes állagúra), hogy a mikobaktériumokat jobban kivonja a vizsgált anyagból

e) Adjunk sóoldatot a homogenizált anyaghoz mozsárban annyi mennyiségben, amennyi a tápközegben lévő anyagszuszpenzió beoltásához és a biológiai vizsgálathoz szükséges (átlagosan legfeljebb 0,5 cm3 egy kémcsőben és 1-2 cm3 a szubkután fertőzéshez egy tengerimalac). Ez a sóoldat mennyisége előre kiszámítható.

f) Az anyag termésének felülvizsgálatát 3, 5, 7, 10, 15 nap elteltével, majd hetente egyszer kell elvégezni.

g) A táptalajon tenyésztett (tipikus vagy atipikus, pigmentált vagy nem pigmentált, nyálkás vagy száraz stb.) mikroorganizmus telepeket mikroszkóppal, szelektív festéssel Ziehl-Neelsen szerint kell elvégezni.

Figyelmet kell fordítani az anyag savtól (vagy lúgtól) való mosásának mértékére, amelyet az anyag idegen mikroflóra általi szennyeződésének kezelésére használtak. Maradék sav mindig jelen lesz a maganyagból származó szuszpenzióban, de ezt minimálisra kell csökkenteni. Ennek jelzője a táptalaj eredeti színének visszaállítása az anyag elvetése utáni 2-4. napon. Ha a táptalaj színe nem áll helyre, ez a maradék sav megnövekedett mennyiségét jelzi. A közeg színe változó intenzitású kékes árnyalatot kap. A (feltételezett) mikobaktériumok szaporodása ebben az esetben lelassul, vagy egyáltalán nem fog létezni, különösen a tuberkulózis kórokozója, mivel a termesztési rendet igényesebbé teszi. A visszamaradó savmennyiség bizonyos mértékig bakteriosztatikusan hat a mikobaktériumokra.

Az anyag beoltása után a kémcsövek lezárására pamut és pamut-géz dugót lehet használni, majd paraffinos, gumimentes és gumis, kivágott ferde hornyú, kortikális és fém dugókkal (redőnyökkel) tölthető fel.

Egy izolált mikobaktérium tenyészet faji hovatartozásának meghatározásakor számos (kb. 300) különböző vizsgálat ismert: kulturális-morfológiai, biológiai, biokémiai, szerológiai, meghatározás. gyógyszer-rezisztencia stb. Az állatorvosi gyakorlatban azonban ezek minimumát használják (lásd a kézikönyvet). Laboratóriumok számára elegendő meghatározni a következő fajok mikobaktériumainak izolált tenyészetét: szarvasmarha, ember és madár, amelyet biológiai vizsgálattal határoznak meg, valamint atípusos mikobaktériumok - Runyon (1959) szerint csoportokra osztva: I - fotokromogén (képző pigment fény hatására), II - skotokromogén (fényhatástól függetlenül pigmentet képez - mind sötétben, mind fényben), III - nem kromogén (nem képződik pigment) vagy nem-pigmentáltnak is nevezik őket. a madártuberkulózis kórokozója is ide tartozik), IV - gyorsan szaporodó mikobaktériumok és saválló szaprofiták.

Ehhez meglehetősen hatékony és gazdaságilag indokolt az izolált tenyészet tulajdonságainak tanulmányozása egy rövidített séma szerint, amelyben a fő figyelmet a telepek elsődleges növekedésének megjelenésének időzítésére, a pigmentképződésre, a kulturális- morfológiai és színárnyalati tulajdonságok Ziehl-Neelsen festéssel. Különösen jelentős a köldökzsinór kialakulásának vizsgálata primer vagy akár szubkultúrában a bioassay eredményeivel kombinálva. Felnőtt telepekről kenet készítéséhez célszerű egyidejűleg készíteni mind a telepekről, mind a lebegőanyag és a kondenzátum maradványaiból, pl. a cső alján lévő folyékony részből.

Emellett a laboratóriumi dolgozóknak lehetőségük van nem csak a tuberkulinra reagáló állatok ellenőrző levágására és kutatási anyagminta vételére, hanem az állatok élete során (hörgő- ill. orrnyálka, tej, ürülék, vizelet, váladék, vér stb.), valamint takarmány-, víz-, környezeti tárgyak minták a mikobaktériumok izolálására, és így közvetve bizonyítják a szarvasmarha tuberkulinra adott válaszának okát. További anyagok és minták vetésekor a mikobaktériumok koncentrálására jól ismert módszereket alkalmaznak: ülepítés, flotáció, flotáció-ülepítés és mások.

A mikobaktériumok differenciálódásának rövidített sémája bioassay segítségével