Endotelové bunky, Kupfferove bunky a Ito bunky. Fibróza pečene: minulosť, prítomnosť a budúcnosť O štruktúre a typoch pečeňových lalokov

Sínusové bunky (endotelové bunky, Kupfferove bunky, hviezdicové a jamkové bunky) spolu s oblasťou hepatocytov smerujúcou k lúmenu sínusoidy tvoria funkčnú a histologickú jednotku.

Endotelové bunky lemujú sínusoidy a obsahujú fenestrae, tvoriace stupňovitú bariéru medzi sínusoidou a priestorom Disse. Kupfferove bunky sú pripojené k endotelu.

Hviezdicové bunky pečene sa nachádzajú v priestore Disse medzi hepatocytmi a endotelovými bunkami. Disse priestor obsahuje tkanivový mok, ktorý prúdi ďalej do lymfatických ciev portálových zón. So zvýšením sínusového tlaku sa zvyšuje produkcia lymfy v priestore Disse, ktorá hrá úlohu pri tvorbe ascitu, keď venózny odtok z pečene.

Kupfferova bunka obsahuje špecifické membránové receptory pre ligandy, vrátane Fc fragmentu imunoglobulínu a komplementovej zložky C3b, ktoré hrajú dôležitú úlohu pri prezentácii antigénu.

Kupfferove bunky sa aktivujú počas generalizovaných infekcií alebo traumy. Špecificky absorbujú endotoxín a ako odpoveď produkujú množstvo faktorov, ako je tumor nekrotizujúci faktor, interleukíny, kolagenáza a lyzozomálne hydrolázy. Tieto faktory zvyšujú pocit nepohodlia a malátnosti. Toxický účinok endotoxínu je teda spôsobený sekrečnými produktmi Kupfferových buniek, pretože samotný nie je toxický.

Kupfferova bunka tiež vylučuje metabolity kyseliny arachidónovej vrátane prostaglandínov.

Kupfferova bunka má špecifické membránové receptory pre inzulín, glukagón a lipoproteíny. Sacharidový receptor pre N-acetylglykozamín, manózu a galaktózu môže sprostredkovať pinocytózu niektorých glykoproteínov, najmä lyzozomálnych hydroláz. Okrem toho sprostredkúva vychytávanie imunitných komplexov obsahujúcich IgM.

V pečeni plodu Kupfferove bunky vykonávajú erytroblastoidnú funkciu. Rozpoznanie a rýchlosť endocytózy Kupfferovými bunkami závisí od otopsonínov, plazmatického fibronektínu, imunoglobulínov a tuftsínu, prirodzeného imunomodulačného peptidu. Tieto „pečeňové sitá“ filtrujú makromolekuly rôznych veľkostí. Veľké chylomikróny bohaté na triglyceridy nimi neprejdú a do priestoru Disse môžu preniknúť menšie zvyšky chudobné na triglyceridy, ale bohaté na cholesterol a retinol. Endotelové bunky sa trochu líšia v závislosti od ich umiestnenia v laloku. Skenovacia elektrónová mikroskopia ukazuje, že počet okienok môže byť výrazne znížený vytvorením bazálnej membrány; Tieto zmeny sú obzvlášť výrazné v zóne 3 u pacientov s alkoholizmom.

Sínusové endotelové bunky aktívne odstraňujú makromolekuly a malé častice z obehu prostredníctvom receptorom sprostredkovanej endocytózy. Nesú povrchové receptory pre kyselinu hyalurónovú (hlavná polysacharidová zložka spojivového tkaniva), chondroitín sulfát a na konci glykoproteín obsahujúci manózu, ako aj receptory typu II a III pre fragmenty FcIgG a receptor pre proteín viažuci lipopolysacharid. Endotelové bunky vykonávajú čistiacu funkciu, odstraňujú enzýmy, ktoré poškodzujú tkanivo a patogénne faktory (vrátane mikroorganizmov). Okrem toho čistia krv od zničeného kolagénu a viažu a absorbujú lipoproteíny.

Pečeňové hviezdicové bunky(bunky ukladajúce tuk, lipocyty, Ito bunky). Tieto bunky sa nachádzajú v subendoteliálnom priestore Disse. Obsahujú dlhé výbežky cytoplazmy, z ktorých niektoré sú v tesnom kontakte s bunkami parenchýmu, iné zasahujú do niekoľkých sínusoidov, kde sa môžu podieľať na regulácii prietoku krvi a tým ovplyvňovať portálnu hypertenziu. V normálnej pečeni sú tieto bunky hlavným úložiskom retinoidov; morfologicky sa to prejavuje ako kvapôčky tuku v cytoplazme. Po uvoľnení týchto kvapiek sa hviezdicové bunky stanú podobnými fibroblastom. Obsahujú aktín a myozín a kontrahujú sa, keď sú vystavené endotelínu-1 a substancii P. Keď sú hepatocyty poškodené, hviezdicové bunky strácajú tukové kvapôčky, proliferujú, migrujú do zóny 3, získavajú fenotyp podobný myofibroblastom a produkujú kolagén typu I, III. a IV, a tiež laminín. Okrem toho vylučujú proteinázy bunkovej matrice a ich inhibítory, ako je tkanivový inhibítor metaloproteináz (pozri kapitolu 19). Kolagenizácia Disseovho priestoru vedie k zníženiu vstupu substrátov viazaných na proteíny do hepatocytu.

Jamkové bunky. Sú to veľmi mobilné lymfocyty – prirodzené zabíjačské bunky, pripojené k povrchu endotelu smerom k lúmenu sínusoidy. Ich mikroklky alebo pseudopódia prenikajú do endotelovej výstelky a spájajú sa s mikroklkami parenchymálnych buniek v priestore Disse. Tieto bunky nežijú dlho a sú obnovované cirkulujúcimi lymfocytmi, ktoré sa diferencujú v sínusoidoch. Obsahujú charakteristické granuly a vezikuly s tyčinkami v strede. Pit bunky majú spontánnu cytotoxicitu voči nádorom a vírusom infikovaným hepatocytom.

Interakcie sínusové bunky

Ku komplexnej interakcii dochádza medzi Kupfferovými bunkami a endotelovými bunkami, ako aj medzi sínusoidnými bunkami a hepatocytmi. Aktivácia buniek Kupferalipopolysacharidu inhibuje vychytávanie kyselina hyalurónová endotelové bunky. Tento účinok je pravdepodobne sprostredkovaný leukotriénmi. Cytokíny produkované sínusoidnými bunkami môžu stimulovať aj potláčať proliferáciu hepatocytov.

Vyššie schematické znázornenie Itohovej bunky (HSC) susediacej s blízkymi hepatocytmi (PC), pod pečeňovými sínusovými epitelovými bunkami (EC). S - sínusoida pečene; KC - Kupfferova bunka. Vľavo dole - bunky Ito v kultúre pod svetelným mikroskopom. Vpravo dole - Elektrónová mikroskopia odhaľuje početné tukové vakuoly (L) buniek Itoh (HSC), ktoré uchovávajú retinoidy.

Ito bunky(synonymá: pečeňová hviezdicová bunka, bunka na ukladanie tuku, lipocyt, Angličtina Hepatická hviezdicová bunka, HSC, Ito bunka, Ito bunka) - pericyty obsiahnuté v, schopné fungovať v dvoch rôzne štáty - pokojne A aktivovaný. Aktivované Ito bunky hrajú hlavnú úlohu pri tvorbe jazvového tkaniva pri poškodení pečene.

V intaktnej pečeni sa nachádzajú hviezdicové bunky v pokojný stav. V tomto stave majú bunky niekoľko výbežkov pokrývajúcich sínusovú kapiláru. Ďalšou charakteristickou črtou buniek je prítomnosť zásob vitamínu A (retinoidov) v ich cytoplazme vo forme tukových kvapôčok. Tiché Ito bunky tvoria 5-8% všetkých pečeňových buniek.

Výrastky buniek Ito sú rozdelené do dvoch typov: perisinusoidálny(subendotelové) a interhepatocelulárny. Prvé vychádzajú z bunkového tela a rozprestierajú sa pozdĺž povrchu sínusovej kapiláry a pokrývajú ju tenkými prstovitými vetvami. Perisinusoidálne výbežky sú pokryté krátkymi klkmi a majú charakteristické dlhé mikrovýbežky, ktoré siahajú ešte ďalej pozdĺž povrchu kapilárnej endotelovej trubice. Interhepatocelulárne projekcie, ktoré prekonali platňu hepatocytov a dosiahli susednú sínusoidu, sú rozdelené do niekoľkých perisinusoidných projekcií. Ito bunka teda v priemere pokrýva o niečo viac ako dve susedné sínusoidy.

Keď je pečeň poškodená, stávajú sa Ito bunky aktivovaný stav. Aktivovaný fenotyp je charakterizovaný proliferáciou, chemotaxiou, kontraktilitou, stratou zásob retinoidov a tvorbou buniek podobných myofibroblastom. Aktivované pečeňové hviezdicové bunky tiež vykazujú zvýšené hladiny nových génov, ako sú ICAM-1, chemokíny a cytokíny. Aktivácia označuje začiatok skoré štádium fibrogenézy a predchádza zvýšenej produkcii ECM proteínov. Konečné štádium hojenia pečene je charakterizované zvýšenou apoptózou aktivovaných Ito buniek, v dôsledku čoho sa ich počet prudko zníži.

Farbenie chloridom zlatým sa používa na vizualizáciu buniek Ito pod mikroskopom. Tiež sa zistilo, že spoľahlivým markerom na diferenciáciu týchto buniek od iných myofibroblastov je ich expresia proteínu Reelin.

Príbeh [ | ]

V roku 1876 Karl von Kupfer opísal bunky, ktoré nazval „Sternzellen“ (hviezdicové bunky). Pri farbení oxidom zlata boli v cytoplazme buniek viditeľné inklúzie. Kupfer, ktorý ich mylne považoval za fragmenty červených krviniek zachytených fagocytózou, v roku 1898 revidoval svoje názory na „hviezdicovú bunku“ ako samostatný typ bunky a klasifikoval ich ako fagocyty. V nasledujúcich rokoch sa však pravidelne objavovali popisy buniek podobných Kupfferovým „hviezdicovým bunkám“. Dostali rôzne názvy: intersticiálne bunky, parasinusoidné bunky, lipocyty, pericyty. Úloha týchto buniek zostala záhadou 75 rokov, kým profesor (Toshio Ito) neobjavil určité bunky obsahujúce inklúzie tuku v perisinusoidálnom priestore ľudskej pečene. Ito ich nazval „shibo-sesshu saibo“ – bunky absorbujúce tuk. Uvedomil si, že inklúzie sú tuk produkovaný bunkami z glykogénu, zmenil názov na „shibo-chozo saibo“ – bunky ukladajúce tuk. IN

Kľúčové slová

PEČEŇ / STELÁTOVÉ CELLS ITO/ MORFOLÓGIA / CHARAKTERISTIKA / VITAMÍN A / FIBRÓZA / PEČEŇ / PEČEŇOVÉ HVIEZDOVÉ BUNKY / MORFOLÓGIA / CHARAKTERISTIKA / VITAMÍN A / FIBRÓZA

anotácia vedecký článok o základnej medicíne, autor vedeckej práce - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovič I.A.

Úvod. Úloha hviezdicových buniek Ito (ISC) bola identifikovaná ako jedna z vedúcich vo vývoji fibrózy v pečeni, avšak intravitálna vizualizácia štruktúry Ito v klinickej praxi používaná minimálne. Cieľ práce: prezentovať štrukturálne a funkčné charakteristiky PCI na základe výsledkov cytologickej identifikácie intravitálnych pečeňových biopsií. Materiály a metódy. Boli použité klasické metódy svetelnej a elektrónovej mikroskopie bioptických vzoriek a pôvodné techniky využívajúce ultratenké rezy, fixáciu a farbenie. Výsledky. Foto ilustrácie svetelnej a elektrónovej mikroskopie biopsií pečene od pacientov s chronická hepatitída C ukazuje štrukturálne charakteristiky ZCI umiestneného na rôznych štádiách(pokoj, aktivácia) a v procese transformácie na myofibroblasty. Závery. Aplikácia originálnych metód klinickej morfologickej identifikácie a hodnotenia funkčný stav ZCI zlepší kvalitu diagnostiky a prognózy fibrózy pečene.

Súvisiace témy vedecké práce o základnej medicíne, autor vedeckej práce - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovič I.A.

Klinická cytológia pečene: Kupfferove bunky
2017 / Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Prokopchik N.I.
Sledovanie morfologických účinkov autológnych mezenchymálnych kmeňových buniek transplantovaných do pečene pri vírusovej cirhóze (klinické pozorovanie)
2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.
Klinická morfológia pečene: nekróza
2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.
Polymorfizmus pečeňových hviezdicových buniek a ich úloha vo fibrogenéze
2008 / Aidagulová S.V., Kapustina V.I.
Štruktúra sínusových buniek pečene u pacientov s koinfekciou vírusom HIV / hepatitídy C
2013 / Matievskaya N.V., Tsyrkunov V.M., Kravchuk R.I., Andreev V.P.
Mezenchymálne kmeňové bunky ako sľubná metóda na liečbu fibrózy/cirhózy pečene
2013 / Lukashik S. P., Aleynikova O. V., Tsyrkunov V. M., Isaykina Ya I., Romanova O. N., Shimansky A. T., Kravchuk R. I.
Izolácia a kultivácia myofibroblastov pečene potkanov explantačnou metódou
2012 / Miyanovic O., Shafigullina A.K., Rizvanov A.A., Kiyasov A.P.
Patomorfologické aspekty tvorby fibrózy pečene počas infekcie HCV a iných lézií pečene: moderné koncepty
2009 / Lukashik S. P., Tsirkunov V. M.
Analýza potkaních myofibroblastov získaných zo štruktúr portálneho traktu pečene explantačnou metódou
2013 / Miyanovic O., Katina M. N., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.
Transplantované pečeňové hviezdicové bunky sa podieľajú na regenerácii orgánov po čiastočnej hepatektómii bez rizika rozvoja fibrózy pečene
2012 / Shafigullina A.K., Gumerova A.A., Trondin A.A., Titova M.A., Gazizov I.M., Burganova G.R., Kaligin M.S., Andreeva D.I., Rizvanov A. A., Mukhamedov A. R., Kiyasov A.

Úvod. Úloha Ito hviezdicových buniek (Hepatic Stellate Cells, HSC) bola identifikovaná ako jedna z vedúcich v rozvoji fibrózy pečene, ale použitie intravitálnej vizualizácie HSC štruktúr v klinickej praxi je minimálne. Cieľom práce je prezentovať štrukturálne a funkčné charakteristiky HSC na základe nálezov cytologickej identifikácie vzoriek intravitálnej pečeňovej biopsie. Materiály a metódy. Boli aplikované klasické metódy svetelnej a elektrónovej mikroskopie bioptických vzoriek v rámci pôvodnej techniky použitia ultratenkých rezov, fixácie a farbenia. Výsledky. Štrukturálne charakteristiky HSC vzoriek pečeňovej biopsie od pacientov s chronickou hepatitídou C sú prezentované na fotografických ilustráciách svetelnej a elektrónovej mikroskopie. HSC sú zobrazené v rôznych štádiách (pokoj, aktivácia) a počas procesu transformácie na myofibroblasty. Závery. Použitie originálnych metód klinickej a morfologickej identifikácie a hodnotenia funkčného stavu HSC umožňuje zlepšiť kvalitu diagnostiky a prognózy fibrózy pečene.

Text vedeckej práce na tému „Klinická pečeňová cytológia: Ito hviezdicové bunky“

UDC 616,36-076,5

KLINICKÁ CYTOLÓGIA PEČENE: ITO STELÁTNE BUNKY

Tsyrkunov V. M. ( [e-mail chránený]), Andreev V. P. ( [e-mail chránený]), Kravchuk R. I. ( [e-mail chránený]), Kondratovič I. A. ( [e-mail chránený]) EE „Štát Grodno lekárska univerzita“, Grodno, Bielorusko

Úvod. Úloha Ito hviezdicových buniek (ISC) bola identifikovaná ako jedna z vedúcich vo vývoji fibrózy v pečeni, ale intravitálna vizualizácia štruktúry ISC sa v klinickej praxi používa minimálne.

Cieľ práce: prezentovať štrukturálne a funkčné charakteristiky PCI na základe výsledkov cytologickej identifikácie intravitálnych pečeňových biopsií.

Materiály a metódy. Boli použité klasické metódy svetelnej a elektrónovej mikroskopie bioptických vzoriek a pôvodné techniky využívajúce ultratenké rezy, fixáciu a farbenie.

Výsledky. Fotografické ilustrácie svetelnej a elektrónovej mikroskopie pečeňových biopsií od pacientov s chronickou hepatitídou C ukazujú štrukturálne charakteristiky PCI v rôznych štádiách (pokoj, aktivácia) a v procese transformácie na myofibroblasty.

Závery. Využitím originálnych metód klinickej morfologickej identifikácie a hodnotenia funkčného stavu pečene sa zlepší kvalita diagnostiky a prognózy fibrózy pečene.

Kľúčové slová: pečeň, Ito hviezdicové bunky, morfológia, charakteristika, vitamín A, fibróza.

Úvod

Nepriaznivým výsledkom väčšiny chronických difúznych pečeňových lézií rôznej etiológie, vrátane chronickej hepatitídy C (CHC), je fibróza pečene, na ktorej vývoji sú hlavnými účastníkmi aktivované fibroblasty, ktorých hlavným zdrojom sú aktivované hviezdicové bunky Ito (Ito stellate bunky).

Hepatická hviezdicová bunka, HSC, Ito bunka, Ito bunka. ZCI prvýkrát opísal v roku 1876 K. Kupffer a pomenoval ho hviezdicové bunky („Stemzellen“). T. Ito, ktorý v nich objavil kvapky tuku, ich najprv označil za absorbujúce tuk („shibo-sesshusaibo“) a potom, keď zistil, že tuk produkujú samotné bunky z glykogénu, bunky ukladajúce tuk („shibo- chozosaibo”). V roku 1971 K. Wake dokázal identitu Kupffferových hviezdicových buniek a Ito buniek ukladajúcich tuk a že tieto bunky „ukladajú“ vitamín A.

Asi 80 % vitamínu A v tele sa akumuluje v pečeni a až 80 % všetkých pečeňových retinoidov sa ukladá v tukových kvapôčkach pečene. Estery retinolu v zložení chylomikrónov vstupujú do hepatocytov, kde sa premieňajú na retinol, pričom vzniká komplex vitamínu A s proteínom viažucim retinol (RBP), ktorý je vylučovaný do perisinusoidálneho priestoru, odkiaľ je ukladaný bunkami.

Úzka súvislosť medzi PCI a pečeňovou fibrózou stanovená K. Popperom preukázala ich nie statickú, ale dynamickú funkciu - schopnosť priamo sa podieľať na remodelácii intralobulárnej perihepatocelulárnej matrix.

Hlavnou metódou morfologického vyšetrenia pečene, vykonávaného na posúdenie zmien v intravitálnych biopsiách, je svetelná mikroskopia, ktorá v klinickej praxi umožňuje určiť aktivitu pečene.

pálenie a štádium chronicity. Nevýhodou metódy je jej nízke rozlíšenie, ktoré neumožňuje hodnotiť štrukturálne vlastnosti buniek, intracelulárnych organel, inklúzií, funkčné charakteristiky. Intravitálne elektrónové mikroskopické vyšetrenie ultraštrukturálnych zmien v pečeni umožňuje doplniť údaje zo svetelnej mikroskopie a zvýšiť ich diagnostickú hodnotu.

V tomto ohľade je identifikácia pečeňových HCI, štúdium ich fenotypu v procese transdiferenciácie a určenie intenzity ich proliferácie najdôležitejším príspevkom k predikcii výsledkov pečeňových ochorení, ako aj k patomorfológii a patofyziológia fibrogenézy.

Cieľom je prezentovať štrukturálne a funkčné charakteristiky PCI na základe výsledkov cytologickej identifikácie intravitálnych pečeňových biopsií.

Materiály a metódy

Intravitálna biopsia pečene bola získaná o aspiračná biopsia pečene u pacientov s CHC (HCV RNA+), od ktorých bol získaný písomný informovaný súhlas.

Pre svetelnú mikroskopiu polotenkých rezov boli vzorky pečeňovej biopsie pacientov s rozmermi 0,5^2 mm fixované pomocou metódy dvojitej fixácie: najprv pomocou metódy Sato Taizan, potom boli vzorky tkaniva dodatočne fixované na 1 hodinu v 1% pripravenom fixatíve osmia. s 0,1 M fosfátovým Sorensenovým pufrom, pH 7,4. Pre lepšiu identifikáciu vnútrobunkových štruktúr a intersticiálnych látok na polotenkých rezoch sa do 1% oxidu osmičelého pridali dvojchróman draselný (K2Cr2O7) alebo kryštály anhydridu chrómu (1 mg/ml). Po dehydratácii vzoriek v sérii alkoholových roztokov so zvyšujúcou sa koncentráciou a acetóne boli vzorky umiestnené do predpolymerizovanej zmesi butylmetakrylátu a styrénu a polymerizované pri 55 °C. Polotenké rezy (hrúbka 1 um) boli postupne zafarbené

azúrový II-základný fuchsín. Mikrofotografie boli urobené pomocou digitálnej videokamery (Leica FC 320, Nemecko).

Elektrónové mikroskopické vyšetrenie sa uskutočnilo vo vzorkách pečeňovej biopsie s rozmermi 0,5 x 1,0 mm, fixovaných 1 % roztokom oxidu osmičelého v 0,1 M tlmivom roztoku Milloniga, pH 7,4, pri +40 °C počas 2 hodín. Po dehydratácii vo vzostupných alkoholoch a acetóne boli vzorky vložené do aralditu. Polotenké rezy (400 nm) sa pripravili z výsledných blokov pomocou ultramikrotómu Leica EM VC7 (Nemecko) a zafarbili sa metylénovou modrou. Preparáty boli skúmané pod svetelným mikroskopom a podobná oblasť bola vybraná na ďalšie štúdium ultraštrukturálnych zmien. Ultratenké rezy (35 nm) boli kontrastne zafarbené 2 % uranylacetátom v 50 % metanole a citrátom olovnatým podľa E. S. Reynoldsa. Elektrónové mikroskopické preparáty boli študované v elektrónovom mikroskope JEM-1011 (JEOL, Japonsko) pri zväčšeniach 10 000 až 60 000 a akceleračnom napätí 80 kW. Na získanie snímok bol použitý komplex pozostávajúci z digitálneho fotoaparátu Olympus MegaViewIII (Nemecko) a softvéru na spracovanie obrazu iTEM (Olympus, Nemecko).

Výsledky a diskusia

PCI sa nachádzajú v perisinusoidálnom priestore (Disse) vo vreckách medzi hepatocytmi a endotelovými bunkami a majú dlhé procesy, ktoré prenikajú hlboko medzi hepatocyty. Väčšina publikácií venovaných tejto populácii KKP poskytuje ich schematické znázornenie, ktoré umožňuje len naznačiť „teritoriálnu“ príslušnosť KKP v pečeni a vo vzťahu k okolitým „susedom“ (obrázok 1).

PCI majú úzky kontakt s endotelovými bunkami prostredníctvom komponentov neúplnej bazálnej membrány a intersticiálnych kolagénových vlákien. Nervové zakončenia prenikajú medzi PCI a parenchymálne bunky, preto je Disseov priestor definovaný ako priestor medzi platničkami parenchymálnych buniek a

komplex HCl a endotelových buniek.

Predpokladá sa, že PCI pochádzajú zo slabo diferencovaných mezenchymálnych buniek priečneho septa vyvíjajúcej sa pečene. Experiment preukázal, že hematopoetické kmeňové bunky sa podieľajú na tvorbe HCl a že tento proces nie je spôsobený fúziou buniek.

Sínusové bunky (SC), predovšetkým HSC, hrajú vedúcu úlohu pri všetkých typoch regenerácie pečene. Fibrózna regenerácia pečene nastáva v dôsledku inhibície kmeňových funkcií pečene a kmeňových buniek kostnej drene. V ľudskej pečeni tvoria HSC 5-15 %, pričom sú jedným zo 4 typov SC, ktoré sú mezenchymálneho pôvodu: Kupfferove bunky, endotelové bunky, Pd bunky. SC pool tiež obsahuje 20-25 % leukocytov.

Cytoplazma HCl obsahuje tukové inklúzie s retinolom, triglyceridmi, fosfolipidmi, cholesterolom, voľnými mastnými kyselinami, a-aktínom a desmínom. Farbenie chloridom zlatým sa používa na vizualizáciu PCI. Experiment ukázal, že markerom diferenciácie HCI od iných myofibroblastov je ich expresia proteínu Reelin.

HSC existujú v pokojných („neaktívnych HSC“), prechodných a dlhodobo aktivovaných stavoch, z ktorých každý je charakterizovaný génovou expresiou a fenotypom (α-MA, ICAM-1, chemokíny a cytokíny).

V neaktívnom stave majú HCI okrúhly, mierne pretiahnutý alebo nepravidelný tvar, veľké jadro a jasný vizuálny znak - lipidové inklúzie (kvapôčky) obsahujúce retinol (obrázok 2).

Počet lipidových kvapôčok v neaktívnej HCI dosahuje 30 alebo viac, majú blízko k sebe, tlačia sa do jadra a tlačia ho na perifériu (obrázok 2). Medzi veľkými kvapkami môžu byť umiestnené malé inklúzie. Farba kvapiek závisí od fixačného prostriedku a farby materiálu. V jednom prípade sú svetlé (obrázok 2a), v druhom tmavozelené (obrázok 2b).

Obrázok 1. - Schéma umiestnenia PCI (stellatecell, perisinusoidal lipocyte) v perisinusoidálnom priestore Disse (space of Disse), internetový zdroj

Obrázok 2. - ZKI v neaktívnom stave

a - ZKI okrúhleho tvaru c vysoký obsah lipidové kvapky so svetlou farbou (biele šípky), hepatocyty (Hz) s prázdnou cytoplazmou (čierna šípka); b - HCl s tmavo sfarbenými lipidovými kvapôčkami, v tesnom kontakte s makrofágom (Mph); a-b - polotenké úseky. Farba azúrovej II je základná purpurová. Mikrofotografie. Zvýšená 1000; c - ZCI s množstvom lipidových kvapiek (viac ako 30), ktoré majú nepravidelný tvar (veľkosť 6 000); d-ultraštrukturálne zložky ICI: l-lipidové kvapôčky, mitochondrie (oranžové šípky), GRES (zelené šípky), Golgiho komplex (červená šípka), uv. 15 000; v-d - elektrónové difrakčné obrazce

Pri elektrónovej mikroskopii sa na pozadí ľahkého lipidového substrátu vytvorí viac osmiofilný okrajový okraj (obrázok 5a). Vo väčšine „kľudových“ HCI je spolu s veľkými lipidovými inklúziami výrazne malé množstvo cytoplazmatickej matrice, chudobné na mitochondrie (Mx) a granulárne endoplazmatické retikulum (GRE). V tomto prípade sú oddelenia mierne vyvinutého Golgiho komplexu jasne viditeľné vo forme stohu 3-4 sploštených cisterien s mierne rozšírenými koncami (obrázok 2d).

Za určitých podmienok aktivované HSC získavajú zmiešaný alebo prechodný fenotyp, ktorý kombinuje morfologické charakteristiky buniek obsahujúcich lipidy a buniek podobných fibroblastom (obrázok 3).

Prechodný fenotyp PCI má tiež svoje morfologické charakteristiky. Bunka nadobúda predĺžený tvar, znižuje sa počet lipidových inklúzií a znižuje sa počet invaginácií nukleolémy. Objem cytoplazmy sa zvyšuje, obsahuje početné cisterny GES s naviazanými ribozómami a voľnými ribozómami, Mx. Pozoruje sa hyperplázia komponentov lamelárneho Golgiho komplexu, reprezentovaná niekoľkými hromadami 3-8 sploštených cisterien, zvyšuje sa počet lyzozómov zapojených do degradácie.

Obrázok 3. - ZKI v prechodnom stave

a - ZKI (biele šípky). Polotenký plátok. Farba azúrovej II je základná purpurová. Mikrofotografia. Zvýšená 1000; b - HCl podlhovastého tvaru a s malým počtom lipidových kvapôčok; uv. 8 000; c - ZCI v kontakte s Kupfferovými bunkami (KC) a lymfocytmi (Lc), uv. 6 000 (Hz - hepatocyt, l - lipidové kvapky, E - erytrocyt); d - mitochondrie (oranžové šípky), GRES (zelené šípky), Golgiho bunka (červená šípka), lyzozómy (modré šípky), úroveň 20 000; b, c, d - obrazce elektrónovej difrakcie

lipidových kvapôčok (obrázok 3d). Hyperplázia komponentov GRES a Golgiho komplexu je spojená so schopnosťou fibroblastov syntetizovať molekuly kolagénu, ako aj modelovať ich posttranslačnou hydroxyláciou a glykozyláciou v endoplazmatickom retikule a prvkoch Golgiho komplexu.

V nepoškodenej pečeni PCI v pokojnom stave pokrýva svojimi procesmi sínusovú kapiláru. Procesy PCI sa delia na 2 typy: perisinusoidálne (subendotelové) a interhepatocelulárne (obrázok 4).

Prvé opúšťajú bunkové telo a rozširujú sa pozdĺž povrchu sínusovej kapiláry a pokrývajú ju tenkými prstovitými vetvami. Sú pokryté krátkymi klkmi a majú charakteristické dlhé mikroejekcie, ktoré siahajú ešte ďalej po povrchu endotelovej trubice kapiláry. Interhepatocelulárne projekcie, ktoré prekonali platňu hepatocytov a dosiahli susednú sínusoidu, sú rozdelené do niekoľkých perisinusoidných projekcií. ZKI teda v priemere pokrýva viac ako dve susedné sínusoidy.

Pri poškodení pečene dochádza k aktivácii PCI a procesu fibrogenézy, pri ktorom sa rozlišujú 3 fázy. Označujú sa ako iniciácia, predĺženie a rozlíšenie (rozlíšenie fibrózneho tkaniva). Tento proces transformácie „kľudových“ HSC na fibrotizujúce myofibroblasty iniciujú cytokíny (^-1,^-6,

Obrázok 4. - Perisinusoidálne (subendotelové) a interhepatocelulárne procesy (výrastky) PCI

a - proces PCI (žlté šípky) vychádzajúci z tela bunky, uv. 30 000; b - rozšírenie ZCI, lokalizované pozdĺž povrchu sínusovej kapiláry, obsahujúce lipidovú kvapôčku, uv. 30 000; c - subendoteliálne lokalizované procesy PCI. Procesy endotelových buniek (ružové šípky); d - interhepatocelulárny proces PCI; oblasť deštrukcie membrán HCI a hepatocytov (čierne šípky), uv. 10 000. Elektrónové difraktogramy

TOT-a), podoxidované metabolické produkty, reaktívne formy kyslíka, oxid dusnatý, endotelín, faktor aktivujúci krvné doštičky (PDGF), aktivátor plazminogénu, transformačný rastový faktor (TGF-1), acetaldehyd a mnohé ďalšie. Priamymi aktivátormi sú hepatocyty v stave oxidačného stresu, Kupfferove bunky, endotelové bunky, leukocyty, krvné doštičky produkujúce cytokíny (parakrinné signály) a samotná PCI (autokrinná stimulácia). Aktivácia je sprevádzaná expresiou (zaradením do práce) nových génov, syntézou cytokínov a proteínov extracelulárnej matrix (typy I, III, U kolagény).

V tomto štádiu môže byť proces aktivácie PCI dokončený stimuláciou tvorby protizápalových cytokínov v PCI, inhibíciou produkcie TOT-a makrofágmi v oblasti poškodenia. V dôsledku toho je počet HCI prudko znížený, podliehajú apoptóze a nevyvíjajú sa fibrózne procesy v pečeni.

V druhej fáze (predĺženej), s predĺženým konštantným parakrinným a autokrinným vystavením aktivačným stimulom, sa aktivovaný fenotyp „udrží“ v PCI, charakterizovaný transformáciou PCI na kontraktilné bunky podobné myofibroblastom, ktoré vykonávajú syntézu extracelulárnych buniek. fibrilárny kolagén.

Aktivovaný fenotyp je charakterizovaný proliferáciou, chemotaxiou, kontraktilitou, stratou zásob retinoidov a tvorbou buniek podobných myofibroblastom. Aktivované HSC tiež vykazujú zvýšené množstvo nových génov, ako sú a-SMA, ICAM-1, chemokíny a cytokíny. Aktivácia buniek indikuje nástup skorých štádií fibrogenézy a predchádza zvýšenej produkcii ECM proteínov. Výsledné vláknité tkanivo podlieha remodelácii v dôsledku rozpadu matrice pomocou matricových metaloproteináz (MMP). Na druhej strane je rozklad matrice regulovaný tkanivovými inhibítormi matricových metaloproteináz (TIMP). MMP a TIMP sú členmi rodiny enzýmov závislých od zinku. MMP sa syntetizujú v HCl vo forme inaktívnych proenzýmov, ktoré sa aktivujú po štiepení propeptidu, ale sú inhibované pri interakcii s endogénnymi TIMP - TIMP-1 a TIMP-2. HCI produkujú 4 typy MMP membránového typu, ktoré sú aktivované IL-1p. Spomedzi MMP sa osobitný význam pripisuje MMP-9, neutrálnej matricovej metaloproteináze, ktorá pôsobí proti kolagénu typu 4, ktorý je súčasťou bazálnej membrány, ako aj proti čiastočne denaturovanému kolagénu typu 1 a 5.

Nárast populácie PCI pri rôznych typoch poškodenia pečene sa posudzuje podľa aktivity významného počtu mitogénnych faktorov, súvisiacich tyrozínkinázových receptorov a ďalších identifikovaných mitogénov, ktoré spôsobujú najvýraznejšiu proliferáciu PCI: endotelín-1, trombín, FGF - fibroblastový rastový faktor, PDGF – endotelový rastový faktor ciev, IGF – inzulínu podobný rastový faktor. Ku akumulácii HCI v oblastiach poškodenia pečene dochádza nielen v dôsledku proliferácie týchto buniek, ale aj v dôsledku ich riadenej migrácie do týchto oblastí prostredníctvom chemotaxie, za účasti chemoatraktantov, ako je PDGF a leukocytový chemoatraktant-MCP (monocytový chemotaktický proteín -1).

V aktivovaných HSC je počet lipidových kvapôčok znížený na 1-3 s ich umiestnením na opačných póloch bunky (obrázok 5).

Aktivované HSC nadobúdajú predĺžený tvar, významné oblasti cytoplazmy sú obsadené Golgiho komplexom a sú odhalené pomerne početné cisterny GRES (indikátor syntézy proteínov na export). Počet ďalších organel je znížený: nachádza sa málo voľných ribozómov a polyzómov, jednotlivé mitochondrie a nepravidelne lyzozómy (obrázok 6).

V roku 2007 sa HSC prvýkrát nazývali pečeňové kmeňové bunky, pretože exprimujú jeden z markerov hematopoetických mezenchymálnych kmeňových buniek - CD133.

Obrázok 5. - ZKI v aktivovanom stave

a, b - HCI (modré šípky) s jednotlivými lipidovými inklúziami lokalizovanými na opačných póloch jadra. Perisinusoidný spojivové tkanivo(na obr. 6a) a vrstva medzibunkovej hmoty okolo hepatocytu (na obr. 6b) sú sfarbené do červena. Cytotoxické lymfocyty (fialové šípky). Endoteliálna bunka (biela šípka). Tesný kontakt medzi plazmatickou bunkou (červená šípka) a hepatocytom. Polotenké časti. Farba azúrovej II je základná purpurová. Mikrofotografie. Zvýšená 1000; c, d - ultraštrukturálne zložky HCI: mitochondrie (oranžové šípky), Golgiho komplex (červená šípka), cisterny jeho viacej osmiofilnej cis-strany smerujúce k expandovaným prvkom granulárneho endoplazmatického retikula (zelené šípky), lyzozóm (modrá šípka) (magnitúda 10 000 a 20 000, v tomto poradí); c, d - obrazce elektrónovej difrakcie

Myofibroblasty, ktoré v normálnej pečeni chýbajú, majú tri potenciálne zdroje: prvý - počas vnútromaternicového vývoja pečene, v portálnych traktoch myofibroblasty obklopujú cievy a žlčové cesty počas ich dozrievania a po plný rozvoj pečeň miznú a v portálnych traktoch sú nahradené portálnymi fibroblastmi; po druhé, keď je pečeň poškodená, vytvárajú sa v dôsledku portálnych mezenchymálnych buniek a pokojovej HCI, menej často v dôsledku prechodných epiteliálno-mezenchymálnych buniek. Sú charakterizované prítomnosťou CD45-, CD34-, Desmin+, gliálneho fibrilárneho-asociovaného proteínu (GFAP)+ a Thy-1+.

Nedávne štúdie ukázali, že hepatocyty, cholangiocyty a endotelové bunky sa môžu stať myofibroblastmi prostredníctvom prechodu epitelu alebo endotelu na mezenchymálny (EMT). Tieto bunky zahŕňajú markery ako CD45-, albumín+ (tj hepatocyty), CD45-, CK19+ (tj cholangiocyty) alebo Tie-2+ (endotelové bunky).

Obrázok 6. - Vysoká fibrotická aktivita HCI

a, b - myofibroblast (MFB), bunka obsahuje veľké jadro, prvky GRES (červené šípky), početné voľné ribozómy, polymorfné vezikuly a granule, jednotlivé mitochondrie a jasný vizualizačný znak - zväzok aktínových filamentov v cytoplazme (žlté šípky); odniesli 12 000 a 40 000; c, d, e, f - vysoká fibrotická aktivita HCI, zatiaľ čo lipidové kvapôčky obsahujúce retinoid sú zachované v cytoplazme. Početné zväzky kolagénových fibríl (biele šípky), ktoré zachovávajú (a) a strácajú (d, e, f) špecifické priečne ryhy; odniesli 25 000, 15 000, 8 000, 15 000. Obrazce elektrónovej difrakcie

Okrem toho sa bunky kostnej drene, pozostávajúce z fibrocytov a cirkulujúcich mezenchymálnych buniek, môžu transformovať na myofibroblasty. Sú to bunky CD45+ (fibrocyty), CD45+/- (cirkulujúce mezenchymálne bunky), kolagén typu 1+, CD11d+ a MHC triedy 11+ (obrázok 7).

Literárne údaje potvrdzujú nielen úzku súvislosť medzi proliferáciou oválnych buniek a proliferáciou sínusoidných buniek, ale aj údaje o možnej diferenciácii HCI na pečeňový epitel, čo sa nazývalo mezenchymálno-epiteliálna transformácia perisinusoidálnych buniek.

V stave fibrogénnej aktivácie sú PCI podobné myofibroblastom spolu so znížením počtu a následným vymiznutím lipidových kvapiek charakterizované fokálnou proliferáciou (obrázok 8), imunohistochemickou expresiou markerov podobných fibroblastom, vrátane α-aktínu hladkého svalstva a tvorba pericelulárnych kolagénových fibríl v priestoroch Disse.

Počas vývojovej fázy fibrózy sa zvyšujúca sa hypoxia pečeňového tkaniva stáva faktorom pre dodatočnú nadmernú expresiu prozápalových adhéznych molekúl v kmeňových bunkách - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, prozápalové

Interakcia pečeňových duktálnych progenitorových buniek s pečeňovými myofibroblastmi

HSC podobné myofibroblastom v stave fibrogénnej aktivácie.

Obrázok 7. - Účastníci myofibroblastickej aktivácie PCI

lytické chemoatraktanty - M-CSF, MCP-1 (monocytový chemotaktický proteín-1) a SGS (cytokínmi sprostredkovaný neutrofilný chemoatraktant) a ďalšie, ktoré stimulujú tvorbu prozápalových cytokínov (TGF-b, PDGF, FGF, PAF, SCF, ET-1) a zosilňujú procesy fibrogenézy v pečeni, čím vytvárajú podmienky pre samoudržiavajúcu sa indukciu kontinuálnej aktivácie PCI a procesov fibrogenézy.

Na mikroskopických preparátoch sa perikapilárna fibróza prejavuje vo forme intenzívneho červeného sfarbenia perisinusoidálneho spojivového tkaniva a vrstvy medzibunkovej hmoty okolo hepatocytov (často odumierajúcich). Na preparátoch elektrónového mikroskopu sú fibrotické zmeny vizualizované buď vo forme vytvorených veľkých zväzkov fibríl kolagénových vlákien, ktoré si zachovali priečne ryhy, alebo vo forme masívnych

usadeniny v Disse priestore vláknitej hmoty, čo sú opuchnuté kolagénové vlákna, ktoré stratili svoje periodické ryhy (obrázok 9).

Autor: moderné nápady fibróza je dynamický proces, ktorý môže progredovať a regresovať (obrázok 10).

Nedávno bolo navrhnutých niekoľko špecifických markerov PCI: vitamín A (VA) prekvitá do lipidových kvapôčok, GFAP, p75 NGF receptor a synaptofyzín. Uskutočňuje sa výskum účasti pečeňového HCI na proliferácii a diferenciácii pečeňových kmeňových buniek.

Študovali sme obsah proteínu viažuceho retinol (RSB-4), ktorý tvorí komplex s VA, ktorého koncentrácia v krvnej plazme normálne koreluje s telesnou zásobou VA, z ktorej 80 % sa nachádza v PCI.

Medzi obsahom bol vytvorený vzťah

Obrázok 8. - Fokálna proliferácia PCI v stave fibrogénnej aktivácie

a - hyperplázia PCI (biele šípky) v lúmene rozšírených sínusoidov; b - proliferácia transdiferencovaných HSC (biele šípky), endotelové bunky (ružová šípka). Polotenké časti. Farba azúrovej II je základná purpurová. Mikrofotografie. Zvýšená 1000

Obrázok 9. - Konečné štádium myofibroblastickej aktivácie PCI

a, b - perisinusoidálna fibróza (biele šípky). Perisinusoidálne spojivové tkanivo a vrstva medzibunkovej matrice okolo hepatocytov (b) sú zafarbené bázickou fuchsínovou červenou. HCI sa aktivovali a transformovali na fibroblasty (modré šípky). Hz na obr. a - hepatocyt s devastovanou cytoplazmou. Polotenké časti. Farba azúrovej II je základná purpurová. Mikrofotografie. Zvýšená 1000; c, d - perisinusoidálna a perihepatocelulárna fibróza v pečeňovom laloku, zvýšená elektrónová hustota fibríl kolagénových vlákien; kondenzácia mitochondriálnej matrice v hepatocyte (oranžová šípka). UV.8 000 a 15 000, v tomto poradí. Elektrónové difrakčné vzory

Tabuľka 1. - Ukazovatele obsahu RSB-4 u pacientov s cirhózou pečene (LC) a chronickou hepatitídou (CH) rôznej etiológie, ng/ml (M±t)

Skupina n M±m р

Cirhóza pečene 17 23,6±2,29<0,05

CG, AST normálne 16 36,9±2,05* >0,05

CG, AST >2 normy 13 33,0±3,04* >0,05

CG, ALT normálne 13 37,5±3,02* >0,05

CG, ALT >2 normy 21 35,9±2,25* >0,05

Kontrola 15 31,2±2,82

Poznámka: p - významné rozdiely s kontrolou (str<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Falošný lalok obklopený vláknitou priehradkou. Masseau farbenie - kruh falošného laloku. Maľba podľa Nu.Uv.x50 Masson. UV.x200

Obrázok 10. - Dynamika udalostí vo falošnom laloku pacienta s vírusovou cirhózou 6 mesiacov po transplantácii autológnych mezenchymálnych kmeňových buniek do pečene

Jeme RSB-4 a 4. štádium fibrózy (cirhózy), na rozdiel od chronickej hepatitídy, u ktorej takáto závislosť nebola pozorovaná, bez ohľadu na biochemické markery zápalovej aktivity v pečeni.

Túto skutočnosť je potrebné vziať do úvahy pri zdôvodňovaní substitučnej liečby na odstránenie deficitu VA v organizme, ktorý môže byť spôsobený vyčerpaním potenciálu PCI spôsobeným progresiou fibrózy v pečeni.

1. Maximálnu efektívnosť hodnotenia štrukturálneho a funkčného stavu PCI zabezpečuje morfologické štúdium intravitálnej biopsie so súčasným využitím súboru techník bunkovej vizualizácie (svetlo, elektrónová mikroskopia ultratenkých rezov a originálne metódy fixácie a farbenie).

2. Výsledky morfologickej štúdie PCI umožňujú zlepšiť kvalitu intravitálnej diagnostiky fibrózy, monitorovať ju a predikovať výsledky chronických difúznych pečeňových lézií na vyššej modernej úrovni.

3. Výsledky morfologických záverov umožnia lekárovi dodatočne zahrnúť do formulácie konečnej diagnózy aktualizované údaje o štádiu chronicity (stabilizácia, progresia alebo ústup fibrózy) počas terapie.

Literatúra

1. Ivashkin, V. T. Klinické príznaky prefibrotických zmien: prepis prednášky na celoruskom internetovom kongrese špecialistov v oblasti internej medicíny / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNIST: National Internet Society of Internal Medicine Specialists. - 2013. - Režim prístupu: http://internist. ru/publications/detail/6569/. - Dátum prístupu: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A.P. Oválne bunky – predpokladané pečeňové kmeňové bunky alebo hepatoblasty? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Bunková transplantológia a tkanivové inžinierstvo. - 2006. - T. 2, č. 4. - S. 55-58.

1. Ivashkin, V. T. Klinicheskaya simptomatika dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa specialistov po vnutrennim boleznyam. / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNIST: National "noe Internet-Obshnutnych az a: http : //internist.ru/publications/detail/6569/ - Prístup k údajom: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A. P. Oval "nye kletki - predpolagaemye stvolovye kletki pečeň alebo hepatoblasty? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - 250.46. - T.2. - 58.

3. O úlohe sínusových pečeňových buniek a buniek kostnej drene pri zabezpečovaní regeneračnej stratégie zdravej a poškodenej pečene / A. V. Lundup [et al.] // Bulletin of Transplantology and Artificial Organs. -2010. - T. XII, č. 1. - S. 78-85.

4. Serov, V.V. Morfologické kritériá na hodnotenie etiológie, stupňa aktivity a štádia procesu pri vírusovej chronickej hepatitíde B a C / V.V. Serov, L.O. - 1996. - Číslo 4. - S. 61-64.

5. Štrukturálne a funkčné charakteristiky pečeňových hviezdicových buniek v dynamike fibrózy / O. A. Postniková [et al.] // Fundamental Research. - 2011. - Č. 10.

6. Ultraštrukturálne a imunohistochemické štúdium pečeňových hviezdicových buniek v dynamike fibrózy a cirhózy pečene infekčného vírusového pôvodu / G. I. Nepomnyashchikh [et al.] // Bulletin experimentálnej biológie a medicíny. - 2006. - T. 142, č. 12. - S. 681-686.

7. Shcheglev, A. I. Štrukturálne a metabolické charakteristiky pečeňových sínusových buniek / A. I. Shcheglev, O. D. Mishnev // Pokroky v modernej biológii. - 1991. - T. 3, č. 1. - S. 73-82.

10. Účinky diétneho retinoidu a triglyceridu na lipidové zloženie hviezdicových buniek pečene potkana a hviezdicových buniek lipidových kvapiek / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Sv. 29. - R. 1523-1534.

13. Friedman, S. Hepatická fibróza 2006: Správa z tretej konferencie AASLD Single Topic Conference / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatológia. - 2006. - Zv. 45 ods. - R. 242-249.

18. Iredale, J. P. Hepatic Stellate Cell Behaviour during Resolution of Liver Injury / J. P. Iredale // Semin. Live Dis. -2001. - Vol. 21 ods. - R. 427-436.

19. Kobold, D. Expresia reelínu v pečeňových hviezdicových bunkách a počas opravy pečeňového tkaniva: nový marker na diferenciáciu HSC od iných pečeňových myofibroblastov / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Zv. 36(5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Myofibroblasty ľudskej pečene počas vývoja a chorôb so zameraním na portál (myo)

3. O roli sinusoidal "nyh kletok pecheni i kletok kostnogo mozga v obespechenii regeneratornoj strategie zdorovoj i povrezhdennoj pecheni / A. V. Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010. - T. HII, No. 78-1. .

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriterii ocenki ehtiologii, stepeni aktivnosti a stadii processa pri virusnyh hronicheskih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Archiv patologii.

1996. - č. 4. - S. 61-64.

5. Strukturno-funkcional "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Fundamental"nye issledovaniya. - 2011. - Číslo 10. - S. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dynamickej fibróze a cirroza pečene infekcionno-virusnogo geneza / G. I. Nepomnyashchih // Byulleten" ehksperimental "noj biologii i mediciny. - T.200 No6. - T.200 681 -686.

7. SHCHeglev, A. I. Strukturno-metabolicheskaya harakteristika sinusoidal "nyh kletok pecheni / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, č. 3-82 S. 7.

8. CD34 pečeňové hviezdicové bunky sú progenitorové bunky / C. Kordes // Biochem., Biophys. Res. Bežné. - 2007. -Zv. 352(2). - S. 410-417.

9. Degradácia matricových proteínov pri fibróze pečene / M. J. Arthur // Pathol. Res. Prax. - 1994. - Zv. 190 (9-10).

11. Fetálna pečeň pozostáva z buniek v epiteliálno-mezenchymálnom prechode / J. Chagraoni // Krv. - 2003. - Zv. 101. - S. 2973-2982.

12. Fixácia, dehydratácia a vkladanie biologických vzoriek / A. M. Glauert // Praktické metódy v elektrónovej mikroskopii. - New York: Am. Elsevier, 1975. - Vol. 3, časť 1.

13. Friedman, S. Hepatic fibrosis 2006: Report of the Third AASLD Single Topic Conference / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatology. - 2006. - Zv. 45 ods. - R. 242-249.

14. Gaga, M. D. Ľudské a potkanie stelátové bunky produkujú faktor kmeňových buniek: možný mechanizmus náboru žírnych buniek pri fibróze pečene / M. D. Gaga // J. Hepatol. - 1999. - Zv. 30, č. 5. - S. 850-858.

15. Glauert, A. M. Araldite ako médium na vloženie pre elektrónovú mikroskopiu / A. M. Glauert, R. H. Glauert // J. Biophys. Biochem. Cytol. - 1958. - Sv. 4. - S. 409-414.

16. Hepatálne hviezdicové bunky a portálne fibroblasty sú hlavnými bunkovými zdrojmi kolagénov a lyzyloxidáz v normálnej pečeni a skoro po poranení / M. Perepelyuk // Am. J. Physiol. Gastrointestinálny test. Pečeň Physiol. - 2013. - Zv. 304(6). - S. 605614.

17. Jadro vírusu hepatitídy C a neštrukturálne proteíny vyvolávajú fibrogénne účinky v stelátových bunkách pečene / R. Bataller // Gastroenterológia. - 2004. - Zv. 126, iss. 2. - S. 529-540.

18. Iredale, J. P. Hepatic Stellate Cell Behaviour during Resolution of Liver Injury / J. P. Iredale // Semin. Live Dis. -2001. - Vol. 21 ods. - R. 427-436.

20. Lepreux, S. Myofibroblasty ľudskej pečene počas vývoja a chorôb so zameraním na portálne (myo) fibroblasty / S. Lepreux, A. Desmouliére

fibroblasty / S. Lepreux, A. Desmouliere // Front. Physiol. - 2015. - Spôsob prístupu: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Dátum prístupu: 31.10.2016.

22. Transplantácia kmeňových buniek pochádzajúcich z mezenchymálnej kostnej drene u pacientov s cirhózou pečene súvisiacou s HCV / S. Lukashyk // J. Clin. Prekl. Hepatol. - 2014. - Zv. 2, iss. 4. - S. 217-221.

23. Millonig, G. A. Výhody fosfátového pufra pre roztoky oxidu osmičelého pri fixácii / G. A. Millonig // J. Appl. fyzika. - 1961. - Sv. 32. - S. 1637-1643.

Vol. 158. - S. 1313-1323.

Vol. 24. - S. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Sv. 14. - S. 1213-1217.

30. Najnovší vývoj v biológii myofibroblastov: paradigmy pre remodeláciu spojivového tkaniva / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Zv. 180. - S. 1340-1355.

35. Mezotel odvodený zo septa transversum vedie k vzniku pečeňových hviezdicových buniek a perivaskulárnych mezenchymálnych buniek vo vyvíjajúcej sa myšiej pečeni / K. Asahina // Hepatológia. -2011. - Vol. 53. - S. 983-995.

Vol. 50. - S. 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepatálna angiogenéza a sínusová remodelácia pri chronickom ochorení pečene: nové ciele pre liečbu portálnej hypertenzie? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Zv. 53. - S. 976-980.

39. Wake, K. Hepatické hviezdicové bunky: Trojrozmerná štruktúra, lokalizácia, heterogenita a vývoj / K.

//Predná strana. Physiol. - 2015. - Spôsob prístupu: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Dátum prístupu: 31.10.2016.

21. Ligandy gama modulovaného receptora aktivovaného peroxizómovým proliferátorom, profibrogénne a prozápalové účinky v pečeňových hviezdicových bunkách / F. Marra // Gastroenterológia. -2000. - Vol. 119. - S. 466-478.

23. Millonig, G. A. Výhody fosfátového pufra pre roztoky oxidu osmičelého pri fixácii / G. A. Millonig // J. Appl. Rhysics. - 1961. - Sv. 32. - S. 1637-1643.

24. Pôvod a štrukturálny vývoj skorých proliferujúcich oválnych buniek v pečeni potkana / S. Paku // Am. J. Hepatol. - 2001.

Vol. 158. - S. 1313-1323.

25. Pôvod myofibroblastov pri fibróze pečene / D. A. Brenner // Fibrogenesis Tissue Repair. - 2012. - Zv. 5, suppl. 1. - S. 17.

26. Pôvod a funkcie pečeňových myofibroblastov / S. Lemoinne // Biochim. Biophys. Acta. - 2013. - Zv. 1832 (7). - S. 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF a signálna transdukcia v pečeňových hviezdicových bunkách / M. Pinzani // Front. Biosci. - 2002. - Zv. 7. - S. 1720-1726.

28. Popper, H. Distribúcia vitamínu A v tkanive odhalená fluorescenčnou mikroskopiou / H. Popper // Physiol. Rev. - 1944.

Vol. 24. - R. 205-224.

30. Najnovší vývoj v biológii myofibroblastov: paradigmy pre remodeláciu spojivového tkaniva / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Zv. 180. - R. 1340-1355.

31. Reynolds, E. S. Použitie citrátu olovnatého pri vysokom pH ako elektronepriepustného zafarbenia v elektrónovej mikroskopii / E. S. Reynolds // J. Cell. Biol. - 1963. - Sv. 17. - S. 208-212.

32. Safadi, R. Imunitná stimulácia pečeňovej fibrogenézy bunkami CD8 a zoslabenie transgénnym interleukínom-10 z hepatocytov / R. Safadi // Gastroenterológia. - 2004. - Zv. 127(3). - S. 870-882.

33. Sato, T. Elektrónová mikroskopická štúdia vzorky fixovanej na dlhšie obdobie vo fosfátom pufrovanom formalíne / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - Sv. 31, č. 4. - str. 423-428.

34. Senoo, H. Bunky skladujúce vitamín A (hviezdicové bunky) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - Zv. 75.

36. Stanciu, A. Nové údaje o ITO bunkách / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei // Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat. Iasi. -2002. - Vol. 107, č. 2. - S. 235-239.

37. Suematsu, M. Profesor Toshio Ito: jasnovidec v biológii pericytov / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. - 2000.

Vol. 50. - R. 66-71.

39. Wake, K. Hepatické hviezdicové bunky: Trojrozmerná štruktúra, lokalizácia, heterogenita a vývoj / K. Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B. Phys. Biol. Sci. - 2006. - Zv.

Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B. Phys. Biol. Sci. - 2006. - Zv. 82(4). - S. 155-164.

82(4). - S. 155-164.

40. Wake, K. In Cells of the Hepatic Sinusoid / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Holandsko). - 1986. - Sv. 1. - S. 215-220.

41. Watson, M. L. Farbenie tkanivových rezov pre elektrónovú mikroskopiu ťažkými kovmi / M. L. Watson // J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. - Sv. 4. - S. 475-478.

KLINICKÁ CYTOLÓGIA PEČENE: ITO HVIEZDOVÉ BUNIEKY (HEPATICKÉ HVIEZDOVÉ BUNKY)

Tsyrkunov V. M., Andreev V. P., Kravchuk R. I., Kandratovič I. A. Vzdelávacie zariadenie „Grodno State Medical University“, Grodno, Bielorusko

Cieľom práce je prezentovať štrukturálne a funkčné charakteristiky HSC na základe nálezov cytologickej identifikácie vzoriek intravitálnej pečeňovej biopsie.

Materiály a metódy. Boli aplikované klasické metódy svetelnej a elektrónovej mikroskopie bioptických vzoriek v rámci pôvodnej techniky použitia ultratenkých rezov, fixácie a farbenia.

Výsledky. Štrukturálne charakteristiky HSC vzoriek pečeňovej biopsie od pacientov s chronickou hepatitídou C sú prezentované na fotografických ilustráciách svetelnej a elektrónovej mikroskopie. HSC sú zobrazené v rôznych štádiách (pokoj, aktivácia) a počas procesu transformácie na myofibroblasty.

Závery. Použitie originálnych metód klinickej a morfologickej identifikácie a hodnotenia funkčného stavu HSC umožňuje zlepšiť kvalitu diagnostiky a prognózy fibrózy pečene.

Pre cenovú ponuku: Kurysheva M.A. Fibróza pečene: minulosť, prítomnosť a budúcnosť // Rakovina prsníka. 2010. Číslo 28. S. 1713

Fibróza pečene je lokálne alebo difúzne zvýšenie množstva spojivového tkaniva, extracelulárnej matrix (kolagénové fibrózne tkanivo v perisinusoidálnom priestore) a hlavná cesta progresie chronických difúznych ochorení pečene. V počiatočných štádiách fibrózy nie sú žiadne klinické prejavy a až histologické vyšetrenie bioptickej vzorky odhalí nadmernú akumuláciu spojivového tkaniva. Následne fibróza vedie k tvorbe regeneračných uzlín, cievnych anastomóz - vzniku cirhózy pečene. Necirhotická fibróza pečene je zriedkavá a v tejto práci sa o nej neuvažuje.

Procesy fibrózy v pečeni sa skúmali mnoho rokov (tabuľka 1), ale až po objavení úlohy hviezdicových buniek v procesoch fibrózy sa získali nové možnosti antifibrotickej liečby.

Patogenéza fibrózy pečene
Sínusové bunky - endotelové, Kupfferove bunky, hviezdicové bunky (Ito bunka, hviezdicová bunka, bunka uchovávajúca retinoid, lipocyt) spolu s oblasťou hepatocytov smerujúcou k lúmenu sínusoidov tvoria funkčnú jednotku. Okrem buniek sa v oblasti sínusoidov nachádza extracelulárna matrica (ECM), viditeľná len pri ochoreniach pečene. Všetky bunky, ktoré tvoria sínusoidy, sa môžu podieľať na tvorbe ECM. Normálne existuje rovnováha medzi faktormi fibrogenézy a antifibrotickými faktormi. Hlavnú úlohu pri fibróze zohrávajú Ito bunky, ktoré produkujú profibrotické a antifibrotické faktory. Antifibrotické faktory zahŕňajú matricové metaloproteázy (MMP), ktoré sa podieľajú na deštrukcii ECM proteínov (kolagenázy, želatinázy, stromolyzíny). Aktivitu MMP potláčajú tkanivové inhibítory matricových metaloproteáz (TIMP), ktoré sú tiež produkované bunkami Ito.
Pri poškodení pečene sa uvoľňujú biologicky aktívne látky, ktoré aktivujú makrofágy a sínusový endotel, pričom sa uvoľňujú IL-1, TNFα, oxid dusnatý, endotelín, pôsobiace na Ito bunky. Keď sú aktivované, hviezdicové bunky produkujú faktor aktivujúci doštičky PDGF a transformujúci rastový faktor TGFβ 1. Pod vplyvom TGFβ 1 sa bunky Ito začnú samé aktivovať a migrovať do oblastí zápalu. Dochádza k zmene fenotypu Ito buniek – transformujú sa na myofibroblasty, ktoré pokračujú v produkcii TGFβ 1 a začnú produkovať ECM. Nerovnováha medzi fibrotickými a antifibrotickými faktormi vedie k 3-10-násobnému zvýšeniu zložiek ECM a zmene jeho zloženia (prevaha kolagénu typu I a III). Redistribúcia matrice do priestoru Disse, jej expanzia, kapilarizácia sínusoidov je sprevádzaná poruchou výmeny medzi hepatocytmi a krvou, posunom krvi v dôsledku vývoja falošných lalokov a rozvojom cirhózy pečene. Ak ustane pôsobenie zápalových mediátorov, Ito bunky opäť začnú produkovať profibrotické látky a dochádza k poklesu ECM zložiek v priestore Disse. Fibróza v počiatočných štádiách vývoja je teda reverzibilný proces.
Patogenéza fibrózy pečene pri chronickej vírusovej hepatitíde je spojená s indukciou zápalovej bunkovej aktivity infikovanými hepatocytmi, čo vedie k stimulácii Ito buniek. Pri alkoholickom ochorení pečene acetaldehyd a voľné radikály kyslíka aktivujú Ito bunky. Okrem toho etanol podporuje rast gramnegatívnej mikroflóry v čreve, zvyšuje hladinu lipopolysacharidov v portálnej krvi a aktivuje Kupfferove bunky, ktoré produkujú TNFα, pôsobiace na bunky Ito. Patogenéza fibrózy pečene pri nealkoholickom stukovatení pečene je spojená s hyperglykémiou a inzulínovou rezistenciou, čo vedie k zvýšeným hladinám voľných mastných kyselín a steatóze pečene a voľné radikály a prozápalové cytokíny vedú k apoptóze hepatocytov a aktivácii zápalových buniek s progresiou fibróza pečene. Pri primárnej biliárnej cirhóze žlčové bunky vylučujú fibrogénne mediátory, ktoré aktivujú Ito bunky a spúšťajú fibrogenézu.

Reverzibilita fibrózy pečene
Po dlhú dobu bola fibróza pečene považovaná za nezvratný patologický stav. Pred 50 rokmi však boli popísané prípady reverzného rozvoja fibrózy po účinnej terapii hemochromatózy a Wilsonovej-Konovalovovej choroby a následne boli opakovane publikované údaje o reverznom vývoji fibrózy pri autoimunitnej hepatitíde v dôsledku imunosupresívnej liečby, sekundárnej biliárnej cirhóza po chirurgickej dekompresii žlčových ciest, nealkoholická steatohepatitída s poklesom telesnej hmotnosti, alkoholická hepatitída pri abstinencii.
Reverzibilita fibrózy bola pozorovaná pri dlhodobej abstinencii alkoholu, keď po 4-6 týždňoch bol zistený pokles obsahu kolagénu IV. typu, laminínu a kyseliny hyalurónovej v stenách sínusoidov pri biopsii a v krvnom sére - došlo k regresii procesu „kapilarizácie sínusoidov“. Boli zaznamenané aj zmeny odrážajúce funkciu Ito buniek – zvýšenie hladiny MMP-2 a zníženie hladiny jej inhibítora TIMMP-2. V určitých časových intervaloch bol pozorovaný pokles počtu aktínových myofibríl v stenách sínusoidov, čo svedčí o poklese aktivity Ito hviezdicových buniek a ich prechode zo syntézy extracelulárnej matrix k jej degradácii.
Zároveň až zavedením antivírusovej terapie do klinickej praxe bol koncept fibrózy pečene, ako dynamického procesu s možnosťou progresie aj regresie, uznaný ako vedecky dokázaný fakt.
Pokrok viedol k jasnému pochopeniu, že fibróza pečene je reverzibilná a k realistickým očakávaniam, že účinná antifibrotická terapia výrazne zmení manažment pacientov s ochorením pečene a poskytne priaznivú prognózu aj u pacientov s preukázanou cirhózou.
Diagnóza fibrózy pečene
Zlatým štandardom diagnostiky fibrózy pečene je biopsia s histologickým vyšetrením. Histologické hodnotenie sa uskutočňuje podľa Desmetových škál (1984) modifikovaných Serovom; stupnica JSHAK alebo METAVIR. V závislosti od lokalizácie a prevalencie sa rozlišujú tieto formy fibrózy pečene: venulárna a perivenulárna (v strede lalokov a na stenách centrálnych žíl - charakteristické pre chronickú alkoholickú hepatitídu); pericelulárne (okolo hepatocytov pri chronickej vírusovej a alkoholickej hepatitíde); septálny (koncentrický rast vláknitého tkaniva okolo žlčových kanálikov - s vírusovou hepatitídou); portálna a periportálna (pre vírusovú, alkoholickú, autoimunitnú hepatitídu); periduktálna fibróza (okolo žlčových kanálikov pri sklerotizujúcej cholangitíde); zmiešané (prezentujú sa rôzne formy fibrózy).
Kvôli invazívnosti, pomerne veľkej chybovosti histologického vyšetrenia spojenej s „chybami“ ihly pri punkčnej biopsii pečene a rozdielom v interpretácii výsledkov sa pre včasnú diagnostiku patologických procesov v súčasnosti venuje veľká pozornosť ne -invazívne metódy diagnostiky fibrózy. Patria sem bioprediktívne laboratórne testy; elastometria pečene a MR elastografia; Ultrazvuk, CT, MRI pečene, Dopplerov ultrazvuk ciev pečene a sleziny s výpočtom indexov fibrózy a portálnej hypertenzie.
Markery fibrózy sa delia na priame (biomarkery), odrážajúce metabolizmus ECM, a nepriame, indikujúce zlyhanie pečene. Priame markery zahŕňajú karboxy-terminálny peptid prokolagénu typu I, amino-terminálny peptid prokolagénu typu III, TIMP-1, 2, kolagén typu IV, kyselinu hyalurónovú, laminín, MMP-2. Stanovenie týchto látok sa využíva v klinických štúdiách.
Pre klinickú prax boli navrhnuté rôzne vypočítané prognostické indexy na posúdenie závažnosti fibrózy pečene pomocou nepriamych markerov: APRI, ELF, FIB-4, FibroFast, FibroIndex, FibroMeter, FPI, Forns, GUCI, Hepascore, HALT-C, MDA, PGA, PGAA.
Na posúdenie závažnosti fibrózy pečene sa používajú systémy Fibro-test a Acti-test, ktoré sa považujú za alternatívu k biopsii. Fibro-test zahŕňa 5 biochemických indikátorov: alfa 2-makroglobulín (aktivuje Ito bunky), haptoglobín (odráža stimuláciu pečeňových buniek interleukínmi), apolipoproteín A1, gama-glutamyltranspeptidáza, celkový bilirubín. Acti-test (hodnotí sa vírusová nekrozápalová aktivita) okrem uvedených zložiek zahŕňa alanínaminotransferázu - ALT. FibroMax je kombináciou piatich neinvazívnych testov: FibroTest a ActiTest, Steato-Test (diagnostikuje steatózu pečene), NeshTest (diagnostikuje nealkoholickú steatohepatitídu), AshTest (diagnostikuje ťažkú alkoholickú steatohepatitídu). FibroMax deteguje alfa 2-makroglobulín, haptoglobín, apolipoproteín A1, gama-glutamyltranspeptidázu, celkový bilirubín, ALT, AST, glukózu, triglyceridy, cholesterol. Na základe získaných údajov, berúc do úvahy vek a pohlavie pacienta, sa vypočíta štádium fibrózy a úroveň aktivity hepatitídy. Použitie testov je obmedzené príznakmi cholestázy, ktoré negatívne ovplyvňujú diagnostickú hodnotu testov, a vysokými nákladmi na štúdiu.
Prevádzka prístroja založená na ultrazvukovej elastografii pečene prechodom vĺn (vibrácií) cez pečeň a ich zachytením senzorom umožňuje posúdiť stupeň fibrózy v pečeni v skorých štádiách. Prístroj má málo informácií o obezite a ascite.
Magnetická rezonančná elastografia je priama metóda na stanovenie hustoty pečene, umožňujúca stanovenie F0 v porovnaní so zdravými dobrovoľníkmi, čo sa pomocou iných metód hodnotenia fibrózy zatiaľ nepodarilo preukázať.
V budúcnosti je možné určiť prítomnosť a rýchlosť progresie fibrózy v závislosti od etiologického faktora. Riešenie týchto problémov umožňuje diagnostikovať skoré štádiá fibrózy, a teda ju účinne liečiť.

Liečba
Antifibrotická liečba je neoddeliteľne spojená s etiologickou a patogenetickou liečbou chronickej hepatitídy (tab. 2). Vo väčšine prípadov sú lieky na elimináciu etiologických faktorov hepatitídy tiež antifibrotické látky. Antifibrotický účinok bol zistený u antivírusových liekov, pentoxifylínu, fosfatidylcholínu, glukokortikosteroidov, donorov oxidu dusnatého, vitamínu E, antagonistov endotelínových receptorov, antagonistov receptorov angiotenzínu, inhibítorov enzýmu konvertujúceho angiotenzín, silymarínu. Prebieha hľadanie liekov, ktoré inhibujú fibrogenézu na použitie v situáciách, keď je účinok na príčinný faktor obtiažny: antioxidanty (betaín, probukol, N-acetylcysteín), hepatoprotektory (silymarín, UDCA, S-adenosylmetionín, esenciálne fosfolipidy), ktoré znižujú aktivita tumor nekrotizujúceho faktora (pentoxifylín, adiponektín, infliximab).
Prebieha vyhľadávanie liekov s cieleným antifibrotickým účinkom:
- eliminácia poškodzujúceho činidla (interleukín 10, inhibítory TNF - protizápalový účinok; antioxidanty - potlačenie fibrotických procesov v reakcii na oxidačný stres);
- potlačenie profibrotickej aktivity hviezdicových buniek (interferóny, rastový faktor hepatocytov, agonisty PPARγ);
- udržiavanie aktívnej antifibrotickej aktivity hviezdicových buniek (antagonisty TGFβ 1 - znižujú syntézu matrice a zvyšujú jej rozpad; antagonisty PDGF, oxid dusnatý, ACE inhibítory - potláčajú proliferáciu Ito buniek);
- vplyv na sekréciu kolagénov hviezdicovými bunkami pečene (ACE inhibítory, inhibítory polyhydroxylázy, interferón γ - redukujú fibrózu; antagonisty endotelínových receptorov - redukujú fibrózu a portálnu hypertenziu);
- vplyv na apoptózu Ito buniek (hylotoxín, NGF - neuronálny rastový faktor - stimulujú apoptózu);
- zvýšený rozpad kolagénovej matrice (metaloproteinázy, tkanivové inhibítory antagonisty MMP; antagonisty TGFβ 1 - znižujú aktivitu TIMP a zvyšujú aktivitu MMP; relaxín - znižujú aktivitu TIMP a zvyšujú aktivitu MMP).
Sľubne sa javí použitie lieku silymarín (Legalon) na antifibrotické účely. Silymarín je oficiálny názov skupiny štyroch izomérov flavonolignanu (silibinín, izosilibinín, silikristin a silydianín), izolovaných z výťažkov plodov ostropestreca mariánskeho (Cardui mariae fructus) a zahrnutých v Legalone 70 a 140 (dávka silymarínu).
Počas klinických štúdií sa zistilo, že popri protizápalových, antioxidačných, antitoxických, hypolipidemických a antikarcinogénnych účinkoch má silymarín výrazný antifibrotický účinok. Je to spôsobené účinkami na transformujúci rastový faktor β a génovú expresiu v Ito bunkách, ako aj zvýšeným odstraňovaním voľných radikálov a priamou inhibíciou syntézy kolagénu.
Vzťah medzi farmakodynamikou silymarínu/silibinínu a klinickým účinkom lieku Legalon® je uvedený v tabuľke 3. Uvedené mechanizmy účinku určujú terapeutickú hodnotu lieku Legalon® pri difúznych ochoreniach pečene. Početné štúdie preukázali vysokú účinnosť Legalonu® pri dlhodobom používaní pri potláčaní zápalovo-nekrotickej reakcie v pečeni, inhibícii rozvoja fibrózy a znižovaní rizika malígnej transformácie hepatocytov pri cirhóze pečene.
Na modeli alkoholickej fibrózy pečene u opíc morfologická štúdia pečene a štúdia sérových markerov fibrózy odhalili, že zvieratá liečené silymarínom mali výrazne nižšiu progresiu fibrózy a menej často sa u nich vyvinula cirhóza pečene.
Účinok lieku Legalon na fibrózu pečene sa skúmal u 792 pacientov s chronickými ochoreniami pečene vrátane cirhózy. Indikátor P-III-NP bol vybraný ako marker fibrogenézy. Priemerná doba pozorovania bola 107 dní. Pri pôvodne zvýšenej hladine P-III-NP sa po 3 mesiacoch liečby liekom Legalon hladina P-III-NP znížila na normálnu hodnotu.
Výsledky 5 medzinárodných placebom kontrolovaných štúdií (zúčastnilo sa 600 pacientov) ukázali, že 4-ročná miera prežitia pacientov s alkoholickou cirhózou počas užívania lieku Legalon bola štatisticky významne vyššia v porovnaní so skupinou pacientov, ktorí dostávali placebo. Pri analýze podskupín sa ukázalo, že liečba liekom Legalon bola účinná pri alkoholickej cirhóze bez ohľadu na jej závažnosť a štádium cirhózy av podskupine s cirhózou Chaid-Pugh štádia A bez ohľadu na jej etiológiu. V podskupine pacientov s alkoholickou cirhózou na vírusovú hepatitídu neboli počas sledovaného obdobia zaznamenané žiadne úmrtia, kým v skupine s placebom boli 4 úmrtia na dekompenzáciu cirhózy.
Fibróza sa v súčasnosti nazýva základným kameňom chronickej patológie pečene. Práve tá spôsobuje vznik cirhózy pečene, preto je včasná diagnostika a liečba fibrózy v súčasnosti mimoriadne aktuálna a je úlohou pre budúci vedecký výskum.

Literatúra
1. Sherlock Sh, Dooley J. Choroby pečene a žlčových ciest: Praktická príručka. M.: GEOTAR-MED, 2002. 864 s.
2. Bataller R., Brenner D. A. Fibróza pečene. J. Clin. investovať. 2005; 115(2):209-218.
3. Iredale J. P. Modely fibrózy pečene: skúmanie dynamickej povahy zápalu a opravy v pevnom orgáne. J. Clin. investovať. 2007; 117(3):539-548.
4. Parsons C. J., Takashima M., Rippe RA. Molekulárne mechanizmy pečeňovej fibrogenézy. J Gastroenterol Hepatol. 2007; 22(1):79-84.
5. Storozhakov G.I., Ivkova A.N. Patogenetické aspekty fibrogenézy pri chronických ochoreniach pečene. Wedge. Perspectives on Gastroenterology, Hepatology 2009; 2:3-10.
6. Pavlov Ch.S., Zolotarevsky V.B., Tomkevich M.S. Možnosti reverzibilnosti cirhózy pečene. Ross. Journal of Gastroenterology, Hepatology and Coloproctology 2006; 1:20-29.
7. Severov M.V. Reverzibilita fibrózy pečene a cirhózy pri infekcii HCV. Hepatologické fórum 2008; 1:2-6.
8. Pavlov Ch.S., Glushenkov D.V., Ivashkin V.T. Moderné možnosti elastometrie, fibro- a akti-testu v diagnostike fibrózy pečene. Ross. Journal of Gastroenterology, Hepatology and Coloproctology 2008; 4:43-52.
9. Rockey D.C. Antifibrotická terapia pri chronickom ochorení pečene Clin. Gastroenterol. Hepatol. 2005; 3:95-107.
10. Dehmlow C, Erhard J. Hepatology 1996; 23:749-754.
11. Lieber a kol. Gastroenterol. 2003; 37:336-339.
12. Schuppan, Z. Allg. Med. 1998; 74:577-584.