Interklinické bakteriologické laboratórium. Čo je to bakteriologické laboratórium? Čo je test stolice?

Práca s patogénmi infekčných chorôb si vyžaduje, aby laboratórne priestory boli umiestnené v samostatnej budove alebo izolované od nemocničných oddelení a stravovacích jednotiek. Diagnostické laboratóriá musia mať dva vchody: jeden pre zamestnancov, druhý pre dodávku materiálu na testovanie. Je povolené prijímať materiál cez transferové okno. Laboratórne priestory sú rozdelené na „kontaminovanú“ a „čistú“ zónu a sú umiestnené tak, ako sa vykonávajú testy.

„Čistý“ priestor laboratória zahŕňa:

1. Priestor na vrchné oblečenie.
2. Prípravná pracovňa (prípravovňa, umývacia miestnosť na prípravu a plnenie živných médií atď.)
3. Sterilizácia.
4. Miestnosť s chladničkou na skladovanie kultivačných médií a diagnostických prípravkov.
5. Miestnosť na odpočinok a jedenie.
6. Priestor na prácu s dokumentáciou.
7. Úžitkové miestnosti.
8. Toaleta, WC.

Nasledujúce sú umiestnené v „nákazlivej“ zóne:

1. Miestnosť na príjem a registráciu materiálu predloženého na výskum.

3.Miestnosti na vykonávanie bakteriologického výskumu.

4. Miestnosti na vykonávanie sérologických štúdií.

5. Priestor pre luminiscenčnú mikroskopiu.

6. Miestnosť pre zooentomologické práce.

7. Termostat a autokláv.

Priestory, kde sa vykonáva práca so živými organizmami, sú vybavené baktericídnymi lampami.

Úloha laboratória lekárskej mikrobiológie - diagnostika infekčných chorôb. Na tento účel sa patogén izoluje a určí sa imunitná odpoveď tela na zavedenie mikroorganizmov ( sérologická diagnostika). Okrem toho sa identifikujú nosiče patogénnych (choroby spôsobujúcich) mikroorganizmov. Existujú laboratóriá, ktoré vykonávajú virologické štúdie. V špeciálnych sanitárnych a bakteriologických laboratóriách sa vykonáva výskum na identifikáciu stupňa mikrobiálnej kontaminácie vonkajšieho prostredia a rôznych predmetov.

Laboratórna miestnosť určené na mikrobiologický výskum. Mal by byť priestranný a svetlý. Steny sú natreté svetlou olejovou farbou, podlaha je pokrytá linoleom, laboratórne stoly sú pokryté plastom alebo sklom, čo je vhodné na mokré čistenie a dezinfekciu. Laboratórna miestnosť je vybavená pracovnými stolmi pre lekára a laboranta, miestom na farbiace prípravky, termostatom, chladničkou, odstredivkou, mikroskopom, skrinkami, drezom s teplou vodou a studená voda, plynové horáky (pri nedostatku plynu pracujú s liehovými horákmi).

Počet laboratórnych miestností je určený objemom laboratórnych prác. Vo veľkých laboratóriách sú pridelené samostatné miestnosti na prácu s rôznymi typmi patogénov.

Pracovná plocha je umiestnená v blízkosti okna tak, aby svetlo dopadalo zboku alebo priamo. Na stole je položený horák, bakteriologické slučky, tégliky s dezinfekčným roztokom a vata.

Pred začatím práce sa všetko potrebné na štúdium položí na stôl. Horák je inštalovaný vo vzdialenosti rovnajúcej sa predlaktiu pracovníka, t.j. v polohe, ktorá eliminuje zbytočné pohyby pri práci. Veľkosť plameňa v horáku a správna žiara sa upravia pred začatím práce.

Teplota v termostate pri bežnom výskume by mala byť 37°C. Vo veľkých laboratóriách môže byť vybavená špeciálna tepelná miestnosť. Teploty sa zaznamenávajú denne.

Ryža. 1 Sušiaca rúra

V chladničke sa uchovávajú niektoré živné pôdy, diagnostické prípravky, krv, žlč atď.

Centrifúga sa používa na oddelenie hustých častíc z kvapaliny (napríklad červených krviniek zo séra).

Skrinky obsahujú statívy, riad, suché živné médiá, činidlá atď.

V blízkosti umývadla by mala byť nádoba s dezinfekčným roztokom na ošetrenie rúk a lekárnička so súpravou predmetov prvej pomoci.

Box je prísne izolovaná miestnosť na vykonávanie mikrobiologických prác v podmienkach vyžadujúcich špeciálnu sterilitu. Defertilizácia vzduchu sa vykonáva pomocou baktericídnych lámp. Prívod dezinfikovaného vzduchu určitej teploty a vlhkosti do boxu cez prívodné a odsávacie vetranie je najlepšia cesta ustanovenie nevyhnutné podmienky pre prácu. Zvyčajne v boxe pracujú dvaja ľudia. Do boxu vojdú cez predný box, v ktorom sa prezlečú (župan, papuče, čiapka, maska) a do boxu vstúpia druhými dverami.

V boxe sa nehovorí a vyhýba sa zbytočným pohybom.

Miestnosť na prípravu živných médií by mala byť umiestnená vedľa umývacej a sterilizačnej miestnosti. Táto miestnosť by mala mať drez s prívodom teplej a studenej vody, liehovar, sporák (plynový alebo elektrický), skrinky alebo police na skladovanie suchých živných médií, chemických činidiel a sterilného riadu.

Umývanie– miestnosť na umývanie a spracovanie riadu, ktorá musí mať drez (so studenou a horúca voda) a sporákom. Umyváreň je vybavená stolmi, policami a zariadením na umývanie riadu: saponáty, kefy, handry.

Sterilizačná miestnosť obsahuje zariadenia na sterilizáciu čistého riadu, kultivačných médií a dezinfekciu odpadového materiálu: autoklávy, sušiarne a pod.

Ak je k dispozícii samostatná prípravovňa, slúži na prípravu, balenie riadu a iné pomocné práce.

V registratúre alebo časti priestorov, ktorá ju nahrádza, sa prijíma a eviduje materiál prijatý na výskum a vydávajú sa závery mikrobiologického výskumu.

Vivárium– miestnosť na chov pokusných zvierat, dostupná len vo veľkých laboratóriách.

Bakteriologické laboratórium

Bakteriologické laboratórium bolo oddelené ako samostatná jednotka v roku 1996.

Vedúci - kandidát lekárskych vied, bakteriológ najvyššej kategórie Polikarpová Svetlana Veniaminovna

PRIORITNÉ OBLASTI ČINNOSTI

V bakteriologickom laboratóriu sa vykonávajú tieto typy analýz:

Bakteriologické vyšetrenie krvi (hemokultúra) a cerebrospinálnej tekutiny;
- bakteriologické vyšetrenie spúta, tracheálneho aspirátu, bronchiálnej výplachovej vody;
- bakteriologické vyšetrenie výtoku z rôznych ložísk zápalu: tonzilitída, faryngitída, otitída, sinusitída atď.;
- bakteriologické vyšetrenie bodiek, výpotkov, exsudátov;
- bakteriologické vyšetrenie výtoku zo sliznice hrdla a nosa na podmienene patogénnu mikroflóru;
- bakteriologické vyšetrenie moču na určenie stupňa bakteriúrie;
- bakteriologické vyšetrenie genitálnych sekrétov na oportúnnu mikroflóru;
- bakteriologické vyšetrenie výtoku spojovky;
- vyšetrenie výkalov na patogénnu črevnú flóru;
- bakteriologické vyšetrenie stolice na dysbakteriózu;
- bakteriologické vyšetrenie materského mlieka;
- kvalitatívne stanovenie streptokokového antigénu skupiny B;
- kvalitatívne stanovenie antigénu Helicobacter pylori v ľudských výkaloch;
- kvalitatívne stanovenie antigénu toxínov A a B Clostridium ťažkopádne v ľudských výkaloch;
- posúdenie citlivosti/rezistencie izolovaných mikroorganizmov na antibiotiká.

ÚSPECHY

V bakteriologickom laboratóriu sa uskutočňuje výskum na izoláciu, identifikáciu a stanovenie citlivosti patogénnych a podmienene patogénnych mikroorganizmov izolovaných z rôznych biomateriálov na antibiotiká.

Práca laboratória, založená na princípoch klasickej klinickej mikrobiológie, zaviedla nové výskumné metódy, ktoré vychádzajú z najnovších výdobytkov molekulárno-genetických technológií.

Bakteriologické laboratórium vykonáva mikrobiologické štúdie, ktoré spĺňajú moderné ruské a medzinárodné štandardy.

Laboratórni pracovníci každoročne vykonajú bakteriologické vyšetrenia viac ako 10 000 pacientov hospitalizovaných na oddeleniach nemocnice, 6 000 pacientov a novorodencov v pôrodnici, viac ako 5 000 pacientov CDC a kliník Východného správneho obvodu, pričom vykoná viac ako 45 000 mikrobiologických testov za rok. rok.

Na základe laboratória, „Automatizovaný pracovisko mikrobiológ, epidemiológ a chemoterapeut“, ktorý zahŕňa dva programy: MIKROB-AUTOMAT a MIKROBIOLOGICKÝ MONITOROVACÍ SYSTÉM „MIKROB“ (SMM). Programy umožňujú riešiť hlavné úlohy nemocničnej mikrobiologickej služby: neustále sledovanie mikrobiálnej krajiny a úrovne jej antibiotickej rezistencie pre predpisovanie adekvátnej antibiotickej terapie a včasné odhalenie prípady infekcií spojených so zdravotnou starostlivosťou (HAI).

Na zabezpečenie správnej kvality mikrobiologického výskumu sa do laboratória zavádza:

• Systém manažérstva kvality podľa normy GOST R ISO 15189 -15

„Lekárske laboratóriá. Osobitné požiadavky na kvalitu a spôsobilosť“;

• Základy LEAN technológie (Lean production) - prístupy k riadeniu laboratória zamerané na zlepšenie kvality práce znižovaním strát: materiálových, finančných, časových;
• systém 5S- nástroj štíhlej výroby - organizácia pracovného priestoru na vytvorenie optimálne podmienky vykonávať operácie, udržiavať poriadok, čistotu, poriadok, šetriť čas a energiu.

Laboratórium sa od roku 2014 zapája do medzinárodného programu sledovania antibiotickej rezistencie v krajinách strednej Ázie a východnej Európy, ktorý organizuje SZO(UK NEQAS Laboratórium sa podieľa na externom hodnotení kvality laboratórneho výskumu ako expertné laboratórium v ​​sekcii „Klinická mikrobiológia“ (FSVOK).

Bakteriológovia už mnoho rokov vykonávajú cykly zlepšovania certifikácie v nemocnici. Moderné metódy výskum v klinickej mikrobiológii“ pre pracovníkov so stred lekárske vzdelanie Moskovské zdravotnícke zariadenie.

HIGH TECH

• Zavedenie molekulárno-genetických metód v diagnostike infekčných ochorení – polymerázová metóda reťazová reakcia(PCR) „v reálnom čase“;

• stanovenie hlavných mechanizmov rozvoja a šírenia rezistencie baktérií na antibakteriálne lieky fenotypové a genotypové metódy;

• použitie imunochromatografických expresných metód (IMCT) na etiologickú diagnostiku patogénov infekčných a zápalových ochorení;

• vytvorenie a implementácia elektronického modulu odborných posudkov pre bakteriológov, ošetrujúcich lekárov, klinických farmakológov na interpretáciu výsledkov zisťovania citlivosti mikroorganizmov na antimikrobiálne lieky a identifikáciu mechanizmov rezistencie.

VEDECKÁ ČINNOSŤ

Počas existencie katedry boli v laboratóriu vypracované 2 kandidátske dizertačné práce. Pracovníci katedry pravidelne vystupujú na medzinárodných, celoruských, mestských kongresoch, konferenciách, sympóziách a seminároch a pravidelne publikujú vo vedeckých a praktických publikáciách.

Bakteriologické laboratórium spolupracuje:

• FSBI "Federálne výskumné centrum pre epidemiológiu a mikrobiológiu"

ich. Čestný akademik N.F. Gamaleya Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie“;

• FGAU „Vedecké centrum pre zdravie detí“ Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie;
• Federálna štátna rozpočtová inštitúcia „Centrum lekárskeho genetického výskumu“ Ruskej akadémie lekárskych vied;
• Federálna rozpočtová inštitúcia Centrálny výskumný ústav epidemiológie Rospotrebnadzor;
• FBUN Moskovský výskumný ústav epidemiológie a mikrobiológie pomenovaný po. G.N. Gabrichevsky Rospotrebnadzor;
• Katedra reprodukčnej medicíny a chirurgie Moskovskej štátnej lekárskej a zubnej univerzity pomenovaná po A.I. Evdokimovovi (MGMSU);

Vedecká práca sa vykonáva v týchto oblastiach:

• mikrobiologická diagnostika a prevencia infekcií spojených so zdravotnou starostlivosťou (HAI). Mikrobiálna ekológia v zdravotníckych zariadeniach.
• Vlastnosti mikrobiologickej diagnostiky infekcií dolných končatín dýchacieho traktu u pacientov s cystickou fibrózou;
• štúdium mechanizmov rezistencie enterobaktérií na antimikrobiálne lieky;
• vývoj algoritmov na rýchlu diagnostiku prenosu streptokokov skupiny B u tehotných žien a novorodencov.

ČLÁNKY, KONFERENCIE

2016

LABORATÓRNE VYBAVENIE

V súčasnosti je bakteriologické laboratórium vybavené moderným vybavením:

• Automatický analyzátor krvnej kultúry VersaTREK(TREK Diagnostic Systems) - schopnosť diagnostikovať sepsu v čo najkratšom čase - 90% pozitívnych výsledkov je zistených už počas prvého dňa. Maximálny čas pre výskumný protokol je 5
• Bakteriologický analyzátor na identifikáciu a stanovenie citlivosti mikroorganizmov Phoenix 100(BD) - priemerný čas na získanie výsledkov identifikácie je 6-8 hodín, priemerný čas na získanie výsledkov antimikrobiálnej citlivosti je 12-16 hodín.
• Poloautomatický analyzátor iEMSČitateľ(ThermoLabsystems), ktorý umožňuje nielen identifikáciu a stanovenie citlivosti mikroorganizmov, ale aj riešenie mnohých praktických a vedecko-praktických problémov: stanovenie mikrobiálnej kontaminácie moču a iných biomateriálov, vykonávanie laboratórneho monitorovania účinnosti antibakteriálna terapia hodnotiť baktericídnu aktivitu krvného séra a tiež skúmať kinetické modely rastu mikroorganizmov.

Laboratórny informačný systém ALISA je zavedený do práce laboratória, každé pracovisko bakteriológa je automatizované.

TÍM

Pivkina Nadežda Vasilievna

Lekár-bakteriológ najvyššej kategórie, má odbornú rekvalifikáciu v odbore „Bakteriológia“. Člen Medzinárodnej asociácie klinických mikrobiológov a antimikrobiálnych chemoterapeutov (IACMAC), člen federácie laboratórna medicína(FLM). Je spoluautorom mnohých vedeckých článkov o problémoch klinickej mikrobiológie. Pracovné skúsenosti v odbore od roku 1992.

Timofeeva Olga Gennadievna

Bakteriologička najvyššej kategórie absolvovala stáž v odbore „Bakteriológia“ a absolvovala nadstavbové školenie na tému „PCR analýza v klinických diagnostických laboratóriách“. Člen Federácie laboratórnej medicíny (FLM). V súčasnosti pracuje na písaní dizertačnej práce Ph.D. Má publikácie o problémoch klinickej mikrobiológie. Pracovné skúsenosti v odbore od roku 1996.

Bondarenko Natalia Alexandrovna

Bakteriológ prvej kategórie, člen Federácie laboratórnej medicíny (FLM). Je spoluautorom mnohých vedeckých článkov o problémoch klinickej mikrobiológie. Pracovné skúsenosti v odbore od roku 1988.

Balina Valeria Vladimirovna

Bakteriológ, lekár klinickej laboratórnej diagnostiky. Absolvoval stáž v odbore „Klinika laboratórna diagnostika“, má odbornú rekvalifikáciu v odbore „Bakteriológia“. Absolvované zvyšovanie kvalifikácie na tému „Molekulárne genetické metódy v diagnostike infekčných chorôb“. Člen Federácie laboratórnej medicíny (FLM). Pracovné skúsenosti v odbore od roku 2013.

Ošetrovateľský personál

Laboratórium využíva:

• 1 medicínsky technológ
• 1 zdravotnícky laborant
• 5 zdravotníckych laborantov
• 1 laborant
• Všetci zamestnanci majú najvyššiu kvalifikačnú kategóriu.

Bakteriologické laboratórium je vedecká a praktická inštitúcia, ktorá vykonáva imunologické a iné mikrobiologické štúdie. Existujú lekárske, veterinárne a priemyselné bakteriologické laboratóriá.

Lekárske bakteriologické laboratóriá sú organizované na sanitárnych a epidemiologických staniciach atď. na vykonávanie výskumu s cieľom objasniť diagnózy a sanitárnu a epidemiologickú kontrolu. Bakteriologické laboratórium má: mediálnu miestnosť, umyváreň, prípravovňu, sterilizačnú miestnosť a pod. Konštrukcia a vybavenie bakteriologických laboratórií musia byť prispôsobené na vykonávanie výskumu v sterilných podmienkach, ktoré chránia personál pred možnou infekciou. Miestnosť bakteriologického laboratória by mala byť svetlá a priestranná. Je potrebné vylúčiť možnosť prievanu. Špeciálne miesto je vyhradené pre farbiace prípravky.

Povinnou výbavou pracoviska bakteriológa je kahanec, téglik s roztokom kyseliny karbolovej na použité pipety, uzatváracia nádoba na, stojany na skúmavky a bakteriálne slučky, emailové kyvety, pinzety, nožnice, skalpel, sklíčka a krycie sklá. Bakteriologické laboratórium by malo mať kovové podnosy na Petriho misky, pozinkované vedrá či koše na vyhodenie použitého skla. Okrem bežného laboratórneho skla sa do bakteriologických laboratórií dodávajú špeciálne druhy skla: na pestovanie na pevných médiách, bakteriálnych matracoch a pod. Gumové cibuľky sú potrebné aj na nasávanie obzvlášť nebezpečného materiálu do pipiet. Bakteriologický sa musí čisto umyť, sterilizovať tepelným spracovaním a uzavrieť sterilnými vatovými zátkami. Na riad by sa nemali používať chemikálie, pretože stopové množstvá môžu ovplyvniť vývoj mikróbov. Najdôležitejším vybavením bakteriologického laboratória sú prístroje na očkovanie mikroorganizmov (bakteriálne slučky, Pasteurove pipety, sklenené a platinové špachtle). Na očkovanie za aseptických podmienok sú bakteriologické laboratóriá vybavené špeciálnymi sklenenými boxmi vybavenými ultrafialovými lampami (pozri).

Bakteriologické laboratórium potrebuje: chladničku na uchovávanie sér a iných biologických substrátov; mikroskop s iluminátorom; odstredivka; alebo termostatická miestnosť na pestovanie baktérií; zariadenia na pretrepávanie rôznych zmesí; , suchovzdušný sterilizátor (Pasteurova rúra) na sterilizáciu, riad a elektrické sterilizátory. Úžitkové miestnosti na prácu s laboratórnymi zvieratami, na umývanie a sušenie riadu, na plnenie živných médií atď. musia byť primerane vybavené.

Pri práci v bakteriologickom laboratóriu, najmä s patogénnymi mikroorganizmami, je potrebné dodržiavať nasledujúce pravidlá.
1. Všetky osoby prítomné v bakteriologickom laboratóriu musia nosiť plášte.

2. V priestoroch je zakázané jesť a fajčiť.

3. Každý zamestnanec musí využívať len svoje pracovisko.

4. Všetky operácie sa musia vykonávať v súlade s pravidlami sterility: všetky siatie sa vykonáva v blízkosti plameňa horáka, transfúzia kontaminovaných tekutín sa vykonáva cez podnos s dezinfekčným roztokom atď.

5. Všetky zariadenia, ktoré boli v kontakte s infekčným materiálom, musia byť sterilizované alebo zničené.

6. Všetky plodiny, ako aj infikované zvieratá sa berú do úvahy a registrujú sa v časopise pomocou špeciálneho formulára.

Bakteriologické laboratórium je vedecká a praktická inštitúcia, ktorá vykonáva mikrobiologický výskum. Klinické diagnostické bakteriologické laboratóriá v nemocniciach v závislosti od ich profilu vykonávajú štúdie potrebné na stanovenie alebo objasnenie diagnózy. Bakteriologické laboratóriá na hygienických a epidemiologických staniciach vykonávajú preventívne vyšetrenia obyvateľstva a sanitárny a bakteriologický výskum produkty na jedenie. Bakteriologické laboratóriá sú vysoko špecializované a vykonávajú kontrolné funkcie napríklad v podnikoch vyrábajúcich bakteriálne prípravky. Okrem lekárskych laboratórií existuje sieť veterinárnych bakteriologických laboratórií, ktoré vykonávajú diagnostické a preventívne testy zvierat, a špecializované bakteriologické laboratóriá slúžiace pre potreby Potravinársky priemysel, poľnohospodárstvo a pod. Rôzne výskumné problémy riešia bakteriologické laboratóriá v príslušných výskumných ústavoch.

Veľké bakteriologické laboratórium zahŕňa: samotné laboratórium, prostredie, umyváreň, prípravovňu, sterilizačnú miestnosť a vivárium. Miestnosť bakteriologického laboratória by mala byť svetlá a priestranná. Nad umývadlom je umiestnená fľaša s roztokom na dezinfekciu rúk. Pracovné stoly sú pokryté linoleom alebo sklom. Plynový alebo liehový horák, téglik na použité pipety s 3% roztokom kyseliny karbolovej, nádoba na vatu, bakteriálna slučka, sada bakteriálnych štandardov, stojany na skúmavky, kyvety, pinzeta, nožnice, skalpel, sklíčka a krycie poháre sa položia na stôl. Bakteriologické laboratórium musí byť vybavené nádržami na likvidáciu infikovaného skla. Bakteriologické laboratórium je zvyčajne vybavené špeciálnym stolom na farbiace prípravky.

Ryža. 1. Petriho misky.

Ryža. 2. Matrac pre pestovanie baktérií.

Ryža. 3. Pasteurove pipety.

V bakteriologickom laboratóriu je okrem bežného chemického skla potrebné špeciálne sklo: sklenené Petriho misky (obr. 1) na pestovanie baktérií na pevných pôdach; bakteriálne podložky (obr. 2) na získanie veľkého množstva mikrobiálnej hmoty; Rouxove trubice s viazaním na pestovanie baktérií na húfoch zemiakov; Wassermann rúry 90 mm dlhé a vnútorný priemer. 9 - 10 mm pre staging RSC a aglutinačnú reakciu; zrážacie rúrky 90 mm dlhé a pr. 3-5 mm; Bakteriálne skúmavky na pestovanie baktérií na tekutých a pevných živných médiách; Pasteurove pipety (obr. 3); Mohrove pipety na očkovanie infikovaného tekutého materiálu; automatické pipety alebo pipety s cibuľkami, eliminujúce nasávanie materiálu ústami. Sklo používané v bakteriologickom laboratóriu sa musí vylúhovať v 1-2 % roztoku HCl a sterilizovať pomocou vysoká teplota. Očkovanie na tuhé živné pôdy sa uskutočňuje pomocou sklenených špachtlí (obr. 4) a bakteriálnej slučky (obr. 5). Baktérie sa pestujú v termostatoch alebo v termostatických miestnostiach.

Ryža. 4. Sklenené špachtle.

Ryža. 5. Bakteriálna slučka.

Bakteriologické laboratórne štúdium anaeróbne baktérie, musia byť vybavené anaerostatmi a vákuovými čerpadlami, ktoré sa používajú aj na filtráciu a ultrafiltráciu. Pre zachovanie sterility pri práci s bakteriálnymi kultúrami sú bakteriologické laboratóriá vybavené špeciálnymi sklenenými boxmi. Všetky živné pôdy, bakteriálne kultúry a séra sa uchovávajú v chladničke.

Každé bakteriologické laboratórium musí mať odstredivku, trepačku (obr. 6) a mikroskop. Pre väčšinu štúdií sa používa mikroskop MBI-1 s iluminátorom OI-7 a zariadením s fázovým kontrastom.

Ryža. 6. Pretrepávacie zariadenie (schuettelovo zariadenie).

Bakteriologické laboratórium musí byť vybavené sterilizačným zariadením: autokláv, Kochov prístroj, Pasteurova pec, prístroj na koaguláciu séra. Na sterilizáciu tekutých substrátov sa používajú bakteriálne filtre (pozri). Bakteriologické laboratóriá by mali mať prístroje na dávkovanie médií (obr. 7), súpravy činidiel na vykonávanie niektorých chemických analýz, ako aj Michaelisov komparátor alebo potenciometer na stanovenie pH média.

Ryža. 7. Zariadenie na plnenie médií.

Práca so zvieratami v bakteriologickom laboratóriu sa vykonáva iba vo viváriu (pozri).

Pri práci v bakteriologickom laboratóriu je potrebné dodržiavať nasledujúce pravidlá: 1) všetci v laboratóriu musia byť v plášti; 2) každý zamestnanec musí mať pracovisko; 3) v bakteriologickom laboratóriu je zakázané jesť a fajčiť; 4) pri práci s infekčným materiálom by ste mali používať nástroje; nástroje, ktoré boli v kontakte s infekčným materiálom, musia byť sterilizované; 5) pri nasávaní tekutého materiálu sa odporúča použiť žiarovky; všetky pipety musia byť upchaté vatou; 6) transfúzia infikovaných tekutín sa vykonáva cez nádobu s dezinfekčným roztokom; 7) práca s infikovaným materiálom sa vykonáva na horáku, horí okraje skúmavky, slučky, špachtle atď .; 8) misky obsahujúce infikovaný materiál musia byť označené názvom kultúry, číslom a dátumom; 9) ak sa infekčný materiál dostane na okolité predmety, vykonajú dezinfekciu - miesto naplnia dezinfekčným roztokom a spália tampónom s horiacim alkoholom; 10) infikované materiály a nástroje sa zaevidujú, umiestnia do nádrží a sterilizujú v ten istý deň; 11) kultúry sa uchovávajú v agarových kolónach v uzavretých skúmavkách s etiketami; 12) registrácia všetkých plodín, ako aj infikovaných zvierat sa vykonáva v časopise pomocou špeciálneho formulára.

Regulácia pracovných podmienok s patogénmi infekčných chorôb sa vykonáva v súlade so stupňom nebezpečenstva mikroorganizmov pre ľudí. Na základe tohto kritéria boli identifikované štyri skupiny patogénnych biologických činiteľov (PBA):

Skupina I: patogény obzvlášť nebezpečných infekcií (mor, kiahne atď.)

Skupina II: vysoko nákazlivé bakteriálne, plesňové a vírusové infekcie(antrax, cholera, besnota atď.)

Skupina III: patogény bakteriálnych, plesňových, vírusových a protozoálnych infekcií, izolované ako nezávislé nozologické formy(čierny kašeľ, tetanus, tuberkulóza atď.)

Skupina IV: patogény bakteriálnej, plesňovej, vírusovej septikémie, meningitídy, pneumónie, enteritídy, toxických infekcií, akútnej otravy (pseudomonasová infekcia atď.).

Väčšina mikrobiologických laboratórií pracuje s patogénnymi patogénmi skupiny III a IV a iba špecializované laboratóriá študujú patogény obzvlášť nebezpečných infekcií (skupina I a II).

Základné laboratóriá pracujúce s patogénnymi biologickými činiteľmi skupiny III a IV musia spĺňať množstvo požiadaviek (samostatná budova alebo samostatný vchod, prítomnosť vodovodných a elektrických rozvodov, vykurovanie, vetranie a pod.) a disponovať potrebným súborom priestorov v v súlade s výrobnou kapacitou a rozsahom vykonaných štúdií . Každé laboratórium musí mať „čistý“ a „špinavý“ priestor.

„Špinavá“ zóna zahŕňa miestnosti na príjem a záznam materiálu, boxy a miestnosti na vykonávanie mikrobiologických štúdií, termostat a autokláv na dezinfekciu materiálu. Okná a dvere všetkých miestností musia byť tesne uzavreté. Priestory na prácu so živými mikroorganizmami musia byť vybavené baktericídnymi lampami alebo musia mať biologické bezpečnostné skrinky. Prívodné a odsávacie vetranie „špinavého“ priestoru musí byť vybavené filtrami na jemné čistenie odpadového vzduchu. Označenie stolov, autoklávov, nádob s dezinfekčnými roztokmi a stojanov na čistý a infikovaný materiál je povinné. Laboratórium musí byť vybavené špeciálnym nábytkom a mať hladké povrchy podlahy a stien, ktoré sú odolné voči čistiacim a dezinfekčným prostriedkom.

Do „čistej“ zóny patria miestnosti pre prípravné práce (umyváreň, prípravovňa, miestnosť na prípravu a stáčanie kultivačných médií a pod.), miestnosť na prácu s dokumentáciou, miestnosti s chladničkami na skladovanie kultivačných médií a diagnostických liekov, šatník pre vrchné oblečenie, miestnosť na oddych . V „čistej“ zóne je možné pracovať s neživými patogénmi (sérologické, molekulárne genetické, biochemické štúdie).

Zabezpečenie bezpečnosti práce s patogénnymi mikroorganizmami zahŕňa dva hlavné faktory: technický a ľudský. Technickým faktorom je dostupnosť „čistých“ a „špinavých“ zón, zariadení, ochranných systémov atď. potrebných pre prácu. Ľudským faktorom je správnosť konania osoby na zaistenie bezpečnosti, úroveň ovládania profesionálneho vybavenia, znalosť možných zdrojov a mechanizmov infekcie, vhodná príprava a školenie.

S prácou v školiacom bakteriologickom laboratóriu sú spojené aj dva nebezpečné faktory – mikroorganizmy spôsobujúce infekčné ochorenia a otvorený oheň, čo si vyžaduje dodržiavanie protiepidemických a protipožiarnych opatrení. Žiaci sú povinní oboznámiť sa s bezpečnostnými pravidlami a dôsledne ich dodržiavať:

Potrebné:

· práca v lekárskych plášťoch s dlhými rukávmi, zdravotníckych čiapkach a návlekoch na topánky;

· ukladať osobné veci na špeciálne určené miesto, vrchné oblečenie ponechať v šatníku;

· každý typ činnosti sa vykonáva v určitej oblasti: práca s mikroorganizmami - na špeciálne vybavenom laboratórnom stole, vypĺňanie protokolov - na pracovnej ploche;

· ak sa infikovaný materiál dostane na stôl, podlahu alebo iné predmety, ihneď informovať učiteľa a vykonať dezinfekciu;

· Infikované materiály by sa mali umiestniť do odolných vodotesných nádob alebo nádob s dezinfekčným roztokom, ktoré sú pred odstránením z laboratória zapečatené.

· Dvere laboratória musia byť počas práce zatvorené.

· Po skončení práce si dôkladne umyte ruky a v prípade potreby ich ošetrite dezinfekčným roztokom.

· jesť v laboratóriu

· ústami nasajte tekutinu do pipety

· zapáľte jednu alkoholovú lampu od druhej

· nosiť horiacu alkoholovú lampu

· po ukoncení jej urceného pouzitia nechajte alkoholovú lampu horiacu

· ponechať na pracovisku nezafixované prípravky, Petriho misky s kultúrami a iné misky s infekčným materiálom

dotknite sa rukou testovaného materiálu v Petriho miskách s nasadenými očkami

Úvod

Ako všeobecná časť akejkoľvek inej vedy, aj všeobecná bakteriológia sa zaoberá nešpecifickými problémami (povedzme identifikáciou jednotlivé druhy baktérie), ale problémy vo všeobecnosti; jej metodika pokrýva základné postupy, ktoré zisťujú široké uplatnenie v širokej škále laboratórnych štúdií. Táto učebná pomôcka nie je zameraná na identifikáciu žiadnej skupiny mikroorganizmov. To je úlohou nasledujúcich publikácií – o súkromnej a sanitárnej mikrobiológii. Avšak spôsoby uvedené v tomto dokumente môžu byť užitočné v akejkoľvek oblasti, kde sú zahrnuté baktérie, a môžu sa použiť na praktické problémy zahŕňajúce izoláciu a typizáciu baktérií.

Bakteriológia sa stala vedou až potom, čo boli vyvinuté jedinečné techniky, prostredníctvom ktorých naďalej ovplyvňuje a preniká do neskorších vedných odborov ako virológia, imunológia a molekulárna biológia. Technika používania čistých kultúr vyvinutá R. Kochom a imunologické reakcie a chemická analýza prvýkrát použitá L. Pasteurom nestratili svoj význam.

Metodika všeobecnej bakteriológie je v tejto publikácii premietnutá pomocou štruktúry, ktorá je typická pre štandard učebné pomôcky v tejto disciplíne. Na rozdiel od laboratórnych workshopov o kurze mikrobiológie pre univerzity je však v niektorých častiach prezentovaný podrobnejšie a slúži len ako referencia. Táto štruktúra zohľadňuje špecifickú odbornú prípravu a špecializáciu bakteriológov a veterinárnych odborníkov. Materiál je často prezentovaný svojvoľne, takže niektoré metódy sú spomenuté niekoľkokrát kvôli túžbe demonštrovať ich vzájomný vzťah.

Bakteriologické laboratórium

Bakteriologické laboratóriá as štruktúrne jednotky sú organizované ako súčasť krajských, okresných, medziokresných veterinárnych laboratórií, ako aj v štruktúre zonálnych veterinárnych laboratórií. Organizujú sa aj v strediskách sanitárneho a epidemiologického dohľadu, v infekčných nemocniciach, všeobecný typ, niektoré špecializované nemocnice (napríklad v tuberkulóze, reumatológii, dermatovenerológii) a v ambulanciách. Bakteriologické laboratóriá sú súčasťou špecializovaných výskumných inštitúcií. Na potvrdenie alebo stanovenie vhodnosti mäsa na potravinárske účely podľa VSE sa neustále využívajú bakteriologické laboratóriá.

Predmetom výskumu v bakteriologických laboratóriách sú:

1. Výtoky z tela: moč, stolica, spútum, hnis, ako aj krv, patologický a kadaverózny materiál.

2. Objekty vonkajšieho prostredia: voda, vzduch, pôda, výplachy zo zariadení, krmivá, technologické suroviny získané z porážok hospodárskych zvierat.

3. Potravinárske výrobky, vzorky mäsa a mäsových výrobkov, mlieka a mliečnych výrobkov, ktoré je potrebné posúdiť z hľadiska vhodnosti na potravinárske účely.

Priestory bakteriologického laboratória a vybavenie pracoviska

Špecifiká mikrobiologickej práce vyžadujú, aby miestnosť pridelená laboratóriu bola izolovaná od obytných miestností, stravovacích jednotiek a iných vedľajších výrobných priestorov.

Bakteriologické laboratórium zahŕňa: laboratórne miestnosti pre bakteriologický výskum a technické miestnosti; autokláv alebo sterilizácia na dezinfekciu odpadového materiálu a kontaminovaného náradia; umývacia miestnosť vybavená na umývanie riadu; bakteriologická kuchyňa – na prípravu, plnenie do fliaš, sterilizáciu a skladovanie živných pôd; vivárium na chov pokusných zvierat; materiál na skladovanie náhradných činidiel, riadu, vybavenia a vybavenia domácnosti.

Uvedené technické miestnosti ako samostatné konštrukčné celky sú súčasťou veľkých bakteriologických laboratórií. V malých laboratóriách sú bakteriologická kuchyňa a sterilizačná kuchyňa spojené v jednej miestnosti; Neexistuje žiadny špeciálny priestor na chov pokusných zvierat.

Priestory mikrobiologických laboratórií sú rozdelené do 2 zón podľa stupňa nebezpečenstva pre personál:

I. „Infekčná“ zóna - miestnosť alebo skupina laboratórnych miestností, kde sa manipuluje s patogénnymi biologickými agens a personál je oblečený do vhodného typu ochranného odevu.

II. „Čistá“ zóna - priestory, kde sa nepracuje s biologickým materiálom, personál je oblečený v osobnom oblečení.

Pod laboratórnymi miestnosťami, v ktorých sa všetko vyrába bakteriologický výskum, prideľte najsvetlejšie a najpriestrannejšie izby. Steny v týchto miestnostiach do výšky 170 cm od podlahy sú natreté svetlými farbami olejovou farbou alebo obložené dlažbou. Podlaha je pokrytá relínom alebo linoleom. Tento typ povrchovej úpravy vám umožňuje používať dezinfekčné roztoky pri čistení miestnosti.

V každej izbe by malo byť umývadlo s tečúcou vodou a polica na fľašu s dezinfekčným roztokom.

Jedna z izieb je vybavená preskleným boxom - izolovaná miestnosť so zádverím (predboxom) na vykonávanie prác za aseptických podmienok. V boxe je umiestnený stôl na siatie a stolička a nad pracoviskom sú namontované baktericídne lampy. V predsieni je umiestnená skrinka na uskladnenie sterilného materiálu. Okná a dvere miestností v „infekčnej“ zóne musia byť utesnené. Existujúce odsávacie vetranie z „infekčnej“ zóny musí byť izolované od ostatných ventilačných systémov a vybavené jemnými vzduchovými filtrami.

Laboratórna miestnosť je vybavená laboratórnymi stolmi, skriňami a policami na uloženie vybavenia, náradia, farieb a činidiel potrebných pre prácu.

Veľmi veľký význam pre prácu je správna organizácia pracoviska pre bakteriológa a laboranta. V blízkosti okien sú inštalované laboratórne stoly. Pri ich umiestňovaní by ste sa mali snažiť zabezpečiť, aby svetlo dopadalo spredu alebo zo strany pracujúcej osoby, najlepšie na ľavú stranu, ale v žiadnom prípade nie zozadu. Odporúča sa, aby miestnosti na analýzu, najmä na mikroskopiu, mali okná orientované na sever alebo severozápad, pretože práca si vyžaduje úroveň difúzne svetlo. Povrchové osvetlenie stolov pre prácu by malo byť 500 luxov. Pre ľahkú dezinfekciu je povrch laboratórnych stolov pokrytý plastom alebo čalúnený železom. Každý zamestnanec laboratória má pridelené samostatné pracovisko s rozmermi 150 x 60 cm.

Všetky pracoviská sú vybavené predmetmi potrebnými pre každodennú bakteriologickú prácu, ktorých zoznam je uvedený v tabuľke 1.

Stôl 1.

Nevyhnutné položky pre bakteriologickú prácu

Názov položky	Približné množstvo
1. Sada farieb a činidiel na lakovanie
2. Sklenené sklíčka	25-50
3. Krycie sklá	25-50
4. Okuliare s otvormi	5-10
5. Stojan na skúmavky
6. Bakteriálna slučka
7. Sklenené špachtle
8. Kovové špachtle
9. Nádoba z vaty
10. Pipety odmerné na 1, 2, 5, 10 ml	25 z každého zväzku
11. Pasteurove pipety	25-50
12. Pinzeta, nožnice, skalpel	Do 1
13. Nádoby s dezinfekčnými roztokmi
14. Mikroskop s iluminátorom
15. Lupa 5´
16. Olejnička s imerzným olejom
17. Filtračný papier	3-5 listov
18. Nádoba s dezinfekčným roztokom na pipety
19. Alkoholový alebo plynový horák
20. Inštalácia na farbiace prípravky
21. Presýpacie hodiny na 1 alebo 2 minúty	Do 1
22. Hruška s gumenou rúrkou
23. Ceruzka na skle
24. Nádoba alkoholovej vaty
25. Nevyhnutný sterilný riad	-

Dezinfekcia

Dezinfekcia je ničenie mikroorganizmov v objektoch životného prostredia.

V mikrobiologických laboratóriách sa dezinfekčné opatrenia používajú veľmi široko. Pri ukončovaní prác s infekčným materiálom pracovníci bakteriologických laboratórií vykonávajú preventívnu dezinfekciu rúk a pracoviska.

Dezinfekcia sa vykonáva na odpadovom patologickom materiáli (výkaly, moč, spútum, rôzne druhy tekutina, krv) predtým, ako ju vyhodíte do odtoku.

Odstupňované a Pasteurove pipety, sklenené špachtle a kovové nástroje kontaminované patologickým materiálom alebo kultúrou mikróbov sa ihneď po použití spúšťajú do sklenených nádob s dezinfekčným roztokom umiestnených na stole na každom pracovisku.

Sklíčka a krycie sklá používané pri práci tiež podliehajú povinnej dezinfekcii, pretože aj fixovaný a zafarbený náter niekedy zadržiava životaschopné mikroorganizmy, ktoré môžu byť zdrojom vnútrolaboratórnej kontaminácie. Dezinfekčnými prostriedkami sa neošetrujú len tie riady, v ktorých sa pestovali mikroorganizmy. Umiestňuje sa do kovových nádrží alebo zásobníkov, zapečatí sa a odovzdá na autoklávovanie.

Výber dezinfekčného prostriedku, koncentrácia jeho roztoku, pomer medzi množstvom dezinfekčného prostriedku a dezinfikovaným materiálom, ako aj trvanie dezinfekčného obdobia sa stanovujú v závislosti od konkrétnych podmienok, pričom sa berie do úvahy predovšetkým stabilita dezinfikovaných mikróbov, stupeň očakávanej kontaminácie, zloženie a konzistenciu materiálu, v ktorom sa nachádzajú.

Dezinfekcia rúk po práci s infekčným materiálom a pri kontakte s pokožkou. Po ukončení práce s infekčným materiálom sa ruky profylakticky dezinfikujú. Navlhčite vatový tampón alebo gázu 1 % roztokom chlóramínu, utrite najprv ľavú ruku, potom pravú ruku v nasledujúcom poradí: chrbát ruky, palmárny povrch, medziprstové priestory, nechtové lôžka. Najskôr sa teda ošetria najmenej kontaminované oblasti, potom sa prejde na najviac kontaminované oblasti pokožky. Utierajte si ruky 2 minúty dvoma tampónmi za sebou. Keď sa ruky kontaminujú kultúrou patogénneho mikróba alebo patologickým materiálom, kontaminované oblasti pokožky sa najskôr dezinfikujú. Za týmto účelom sa na 3 až 5 minút prikryjú vatou navlhčenou 1 % roztokom chlóramínu, potom sa vata vysype do nádrže alebo vedra s odpadovým materiálom a ruky sa ošetria druhým tampónom. spôsobom ako pri preventívnej dezinfekcii. Po ošetrení chloramínom si umyte ruky teplou vodou a mydlom. Pri práci s baktériami, ktoré tvoria spóry, sa ošetrenie rúk vykonáva 1% aktivovaným chloramínom. Ak sa infekčný materiál dostane do kontaktu s rukami, pôsobenie dezinfekčného prostriedku sa predĺži na 5 minút.

Sterilizácia

Sterilizácia na rozdiel od dezinfekcie zahŕňa zničenie všetkých vegetatívnych a spóronosných, patogénnych a nepatogénnych mikroorganizmov v sterilizovanom objekte. Sterilizácia sa vykonáva rôznymi spôsobmi: parou, suchým horúcim vzduchom, varom, filtráciou atď. Voľba jednej alebo druhej metódy sterilizácie závisí od kvality a vlastností mikroflóry sterilizovaného predmetu.

Príprava a sterilizácia laboratórneho vybavenia

Pred sterilizáciou sa laboratórne sklo umyje a vysuší. Skúmavky, fľaštičky, fľaše, matrace a banky sa uzavrú zátkami z bavlnenej gázy. Umiestnite papierové uzávery na zátky na každej nádobe (okrem skúmaviek).

Gumové, korkové a sklenené zátky sa sterilizujú v samostatnom vrecku priviazanom k ​​hrdlu misky. Petriho misky sterilizujeme zabalené v papieri po 1-10 ks. Pasteurove pipety 3-15 ks. zabalené v baliacom papieri. V hornej časti každej pipety sa umiestni kúsok vaty, aby sa zabránilo vniknutiu materiálu do pipety životné prostredie. Pri obaľovaní pipiet treba dávať veľký pozor, aby sa neodlomili zatavené konce kapilár. Počas prevádzky sa pipety vyberajú z vrecka horným koncom.

Bezpečnostná bavlna sa vloží do hornej časti odmerných pipiet, ako v Pasteurových pipetách, a potom sa zabalí do hrubého papiera, vopred sa nareže na pásy široké 2 až 2,5 cm a dlhé 50 až 70 cm ľavý koniec je zložený a obalený hrotom pipety, potom otáčaním pipety naň naviňte prúžok papiera. Aby sa papier nerozvinul, opačný koniec je skrútený alebo prilepený. Objem zabalenej pipety je napísaný na papieri. Ak sú peračníky, sterilizujú sa v nich odmerné pipety.

Laboratórne sklo je sterilizované:

a) suché teplo pri teplote 180 °C a 160 °C počas 1 hodiny a 150 minút.

b) v autokláve pri tlaku 1,5 atm. po dobu 60 minút, na zničenie mikroflóry spór - 90 minút pri 2 atm.

Sterilizácia injekčných striekačiek. Injekčné striekačky sa sterilizujú v rozobranej forme: oddelene valec a piest v 2% roztoku hydrogénuhličitanu sodného počas 30 minút. Pri práci s mikroflórou obsahujúcou spóry sa sterilizácia vykonáva v autokláve pri 132±2°C (2 atm.) počas 20 minút, pri 126±2°C (1,5 atm.) - 30 minút. Sterilizovaná injekčná striekačka sa po vychladnutí zostaví, do valca sa vloží piest, nasadí sa ihla, pričom sa z nej najskôr odstráni tŕň. Ihla, valec a piest sa odoberajú pomocou pinzety, ktoré sa sterilizujú spolu so striekačkou.

Sterilizácia kovových nástrojov. Kovové nástroje (nožnice, skalpely, pinzety a pod.) sú sterilizované v 2% roztoku hydrogénuhličitanu sodného, ​​ktorý zabraňuje hrdzaveniu a strate ostrosti. Čepele skalpelov a nožníc sa odporúča pred ponorením do roztoku obaliť vatou.

Sterilizácia bakteriálnych slučiek. Bakteriálne slučky vyrobené z platinového alebo nichrómového drôtu sa sterilizujú v plameni alkoholového alebo plynového horáka. Tento spôsob sterilizácie sa nazýva kalcinácia alebo flambovanie.

Slučka je umiestnená vo vodorovnej polohe v spodnej, najchladnejšej časti plameňa horáka, aby sa zabránilo rozstreku spáleného patogénneho materiálu. Po vyhorení sa slučka posunie do zvislej polohy, najprv sa zahreje spodná, potom horná časť drôtu do červena a držiak slučky sa prepáli. Kalcinácia zvyčajne trvá 5-7 sekúnd.

Prípravok na sterilizáciu a sterilizáciu papiera, gázy a vaty. Vata, gáza, filtračný papier sa sterilizujú v suchej peci pri teplote 160°C do hodiny od odčítania tejto teploty na teplomere alebo v autokláve pri tlaku 1 atm. do 30 minút.

Pred sterilizáciou sa papier a gáza narežú na kúsky a vata sa zvinie do guľôčok alebo tampónov požadovanej veľkosti. Potom sa každý druh materiálu samostatne, jeden alebo niekoľko kusov, zabalí do hrubého papiera. Ak sa obal rozbije, sterilizovaný materiál by sa mal znova sterilizovať, pretože je narušená jeho sterilita.

Sterilizácia rukavíc a iných gumených výrobkov. Gumové výrobky (rukavice, rúrky atď.) kontaminované vegetatívnou formou mikróbov sa sterilizujú varením v 2% roztoku hydrogénuhličitanu sodného alebo 30 minút tečúcou parou; pri kontaminácii spóronosnou mikroflórou v autokláve pri tlaku 1,5-2 atm. na 30 alebo 20 minút. Pred sterilizáciou sú gumené rukavice posypané mastencom zvnútra aj zvonka, aby sa nelepili. Medzi rukavice je umiestnená gáza. Každý pár rukavíc je zabalený oddelene do gázy a umiestnený v nádobách v tejto forme.

Sterilizácia patogénnych mikrobiálnych kultúr. Skúmavky a poháre obsahujúce mikrobiálne kultúry, ktoré nie sú potrebné pre ďalšiu prácu, sa umiestnia do kovovej nádrže, veko sa utesní a predloží na sterilizáciu. Kultúry patogénnych mikróbov, vegetatívne formy, sa usmrtia v autokláve počas 30 minút pri tlaku 1 atm. Dodávku nádrží na sterilizáciu do autoklávu vykonáva špeciálne určená osoba proti podpisu. Sterilizačný režim sa zaznamenáva v špeciálnom časopise. Pri ničení kultúr mikróbov skupiny patogenity I a II, ako aj materiálu kontaminovaného alebo podozrivého z kontaminácie patogénmi zaradenými do týchto skupín, sa nádrže s odpadovým materiálom premiestňujú na kovových podnosoch s vysokými stenami v prítomnosti sprevádzajúcej osoby oprávnenej na práca s infekčným materiálom.

Druhy sterilizácie

Sterilizácia varom. Sterilizácia varom sa vykonáva v sterilizátore. Do sterilizátora sa naleje destilovaná voda, pretože voda z vodovodu tvorí vodný kameň. (Sklenené predmety sa ponárajú do studenej vody, kovové predmety do horúcej vody s prídavkom hydrogénuhličitanu sodného). Položky, ktoré sa majú sterilizovať, sa varia na miernom ohni 30-60 minút. Za začiatok sterilizácie sa považuje moment, keď voda v sterilizátore zovrie. Na konci varu sa nástroje odoberú sterilnými pinzetami, ktoré sa varia spolu s ostatnými predmetmi.

Sterilizácia suchým teplom. Sterilizácia suchým teplom sa vykonáva v Pasteurovej peci. Materiál pripravený na sterilizáciu sa umiestni na police tak, aby neprišiel do kontaktu so stenami. Skriňa sa zatvorí a potom sa zapne kúrenie. Dĺžka sterilizácie pri teplote 150°C je 2 hodiny, pri 165°C - 1 hodina, pri 180°C - 40 minút, pri 200°C - 10-15 minút (pri 170°C papier a vata otočte žltá a pri vyšších teplotách zuhoľnatená). Za začiatok sterilizácie sa považuje okamih, keď teplota v rúre dosiahne požadovanú výšku. Na konci sterilizačnej doby sa rúra vypne, ale dvierka skrinky sa neotvoria, kým úplne nevychladnú, pretože studený vzduch vstupujúci do skrinky môže spôsobiť praskliny na horúcom riade.

Sterilizácia parou pod tlakom. Sterilizácia parou pod tlakom sa vykonáva v autokláve. Autokláv pozostáva z dvoch do seba vložených kotlov, plášťa a veka. Vonkajší kotol sa nazýva vodno-parná komora, vnútorný kotol sa nazýva sterilizačná komora. Para vzniká vo vodno-parnom kotli. Materiál, ktorý sa má sterilizovať, sa umiestni do vnútorného kotlíka. V hornej časti sterilizačného kotla sú malé otvory, cez ktoré prechádza para z vodno-parnej komory. Veko autoklávu je hermeticky priskrutkované k puzdru. Okrem uvedených hlavných častí má autokláv množstvo dielov, ktoré regulujú jeho činnosť: tlakomer, vodomerné sklo, poistný ventil, výstupné, vzduchové a kondenzačné ventily. Tlakomer sa používa na určenie tlaku vytvoreného v sterilizačnej komore. Normálny atmosférický tlak (760 mm Hg) sa považuje za nulový, preto v nečinnom autokláve je ručička tlakomera na nule. Medzi údajmi na tlakomere a teplotou existuje určitý vzťah (tabuľka 2).

Tabuľka 2

Vzťah medzi údajmi tlakomeru a teplotou varu vody

Červená čiara na stupnici tlakomeru určuje maximálny prevádzkový tlak, ktorý je povolený v autokláve. Poistný ventil slúži na ochranu pred nadmerným nárastom tlaku. Je nastavený na daný tlak, to znamená tlak, pri ktorom sa musí vykonať sterilizácia, keď ihla tlakomeru prekročí čiaru, ventil autoklávu sa automaticky otvorí a uvoľní prebytočnú paru, čím sa spomalí ďalší nárast tlaku.

Na bočnej stene autoklávu sa nachádza vodomer zobrazujúci hladinu vody vo vodno-parnom bojleri. Na sklenenej trubici vodomeru sú dve vodorovné čiary - dolná a horná, označujúce prípustnú dolnú a hornú hladinu vody vo vodno-parnej komore, resp. Vzduchový ventil je určený na odvádzanie vzduchu zo sterilizačnej a vodno-parnej komory na začiatku sterilizácie, pretože vzduch ako zlý vodič tepla narúša sterilizačný režim. Na dne autoklávu sa nachádza kondenzačný kohútik, ktorý oslobodzuje sterilizačnú komoru od kondenzátu vznikajúceho počas zahrievania sterilizovaného materiálu.

Pravidlá pre prácu s autoklávom. Pred začatím práce skontrolujte autokláv a ovládacie zariadenie. V autoklávoch s automatickým riadením pary sú šípky na elektrickom vákuovom manometri vodno-parnej komory nastavené v súlade s režimom sterilizácie: dolná šípka je nastavená na 0,1 atm. spodná, horná - o 0,1 atm. nad prevádzkovým tlakom sa vodno-parná komora naplní vodou po hornú značku odmerky. Počas obdobia plnenia vodou je ventil na potrubí, ktorým para vstupuje do komory, udržiavaný otvorený, aby sa umožnil voľný výstup vzduchu z kotla. Sterilizačná komora autoklávu je naplnená materiálom, ktorý sa má sterilizovať. Potom sa veko (alebo dvierka) autoklávu zatvorí, pevne zaistí centrálnym zámkom alebo skrutkami; aby ste predišli deformácii, skrutky zaskrutkujte krížom (pozdĺž priemeru). Potom zapnite zdroj ohrevu (elektrický prúd, para), zatvorte ventil na potrubí spájajúcom zdroj pary so sterilizačnou komorou. So začiatkom tvorby pary a vytvorením tlaku vo vodno-parnej komore sa vykoná preplachovanie (odvod vzduchu zo sterilizačného kotla). Spôsob odstraňovania vzduchu je určený konštrukciou autoklávu. Najprv vzduch vychádza v samostatných častiach, potom sa objaví hladký, nepretržitý prúd pary, čo naznačuje, že vzduch bol úplne vytlačený zo sterilizačnej komory. Po odstránení vzduchu sa kohútik zatvorí a v sterilizačnej komore začne postupné zvyšovanie tlaku.

Za začiatok sterilizácie sa považuje okamih, keď ručička tlakomeru ukazuje nastavený tlak. Potom sa intenzita ohrevu zníži tak, aby tlak v autokláve zostal na požadovanú dobu na rovnakej úrovni. Po uplynutí doby sterilizácie sa zahrievanie zastaví. Zatvorte ventil v potrubí privádzajúcom paru do sterilizačnej komory a otvorte ventil na kondenzačnom (dolnom) potrubí, aby ste znížili tlak pary v komore. Keď ručička tlakomeru klesne na nulu, pomaly uvoľnite upínacie zariadenia a otvorte veko autoklávu.

Teplota a trvanie sterilizácie sú určené kvalitou sterilizovaného materiálu a vlastnosťami mikroorganizmov, ktorými je infikovaný.

Kontrola teploty v sterilizačnej komore sa vykonáva periodicky pomocou bakteriologických testov. Biotesty vyrábajú bakteriologické laboratóriá Centra citlivých vied. Ak tieto skúšky neprejdú, skontroluje sa technický stav autoklávu.

Sterilizácia prúdiacou parou. Sterilizácia prúdiacou parou sa vykonáva v Kochovom prístroji na prúdenie pary alebo v autokláve s odskrutkovaným vekom a otvoreným výstupným ventilom. Kochov prístroj je kovový dutý valec s dvojitým dnom. Priestor medzi horným a spodným spodným plátom je vyplnený do 2/3 vodou (je tam kohútik na vypustenie zvyšnej vody po sterilizácii). Veko prístroja má v strede otvor na teplomer a niekoľko malých otvorov na únik pary. Materiál určený na sterilizáciu sa voľne vloží do komory prístroja, aby sa zabezpečil maximálny kontakt s parou. Za začiatok sterilizácie sa považuje čas od okamihu, keď voda vrie a para vstúpi do sterilizačnej komory. Vo fluidnom parnom prístroji sa sterilizujú najmä živné médiá, ktorých vlastnosti sa menia pri teplotách nad 100°C. Sterilizáciu prúdiacou parou je potrebné opakovať, pretože jednorazové zahriatie na teplotu 100°C nezabezpečí úplnú dezinfekciu. Táto metóda sa nazýva frakčná sterilizácia: sterilizovaný materiál sa ošetruje prúdom pary 30 minút denne počas 3 dní. V intervaloch medzi sterilizáciami sa materiál udržiava pri izbovej teplote, aby spóry vyklíčili do vegetatívnych foriem, ktoré pri nasledujúcom zahrievaní odumierajú.

Tyndalizácia. Tyndalizácia je frakčná sterilizácia s použitím teplôt pod 100 °C, ktorú navrhol Tyndall. Materiál určený na sterilizáciu sa zahrieva vo vodnom kúpeli vybavenom termostatom hodinu pri teplote 60-65 °C počas 5 dní alebo pri teplote 70-80 °C počas 3 dní. V intervaloch medzi zahrievaním sa ošetrovaný materiál udržiava pri teplote 25 °C, aby spóry vyklíčili do vegetatívnych foriem, ktoré pri nasledujúcom zahrievaní odumierajú. Tindalizácia sa používa na defertilizáciu živných médií obsahujúcich bielkoviny.

Mechanická sterilizácia pomocou bakteriálnych ultrafiltrov. Bakteriálne filtre sa používajú na odstraňovanie tekutiny z baktérií v nej obsiahnutých, ako aj na oddelenie baktérií od vírusov, fágov a exotoxínov. Vírusy nie sú zadržiavané bakteriálnymi filtrami, a preto ultrafiltráciu nemožno považovať za sterilizáciu v akceptovanom zmysle slova. Na výrobu ultrafiltrov sa používajú jemne porézne materiály (kaolín, azbest, nitrocelulóza atď.), ktoré dokážu zachytiť baktérie.

Azbestové filtre (Seitz filtre) sú azbestové platne s hrúbkou 3-5 mm a priemerom 35 a 140 mm na filtrovanie malých a veľkých objemov kvapalín. V našej krajine sa azbestové filtre vyrábajú v dvoch značkách: „F“ (filtračné), ktoré zadržujú suspendované častice, ale umožňujú baktériám prejsť, a „SF“ (sterilizačné), hustejšie, zadržiavajúce baktérie. Pred použitím sa azbestové filtre namontujú do filtračných zariadení a spolu s nimi sa sterilizujú v autokláve. Azbestové filtre sa používajú jednorazovo. Membránové ultrafiltre sú vyrobené z nitrocelulózy a sú to biele disky s priemerom 35 mm a hrúbkou 0,1 mm.

Bakteriálne filtre sa líšia veľkosťou pórov a sú označené sériovými číslami (tabuľka 3).

Tabuľka 3.

Bakteriálne filtre

Bezprostredne pred použitím sa membránové filtre sterilizujú varom. Filtre sa vložia do destilovanej vody, zahrejú sa na teplotu 50-60°C, aby sa nekrútili, a varia sa na miernom ohni 30 minút, pričom sa voda 2-3 krát vymení. Aby nedošlo k poškodeniu, sterilizované filtre sa zo sterilizátora vyberú flambovanou a vychladnutou pinzetou s hladkými hrotmi.

Na filtrovanie kvapalín sa bakteriálne filtre montujú do špeciálnych filtračných zariadení, najmä do filtra Seitz.

Skladá sa z 2 častí: hornej časti v tvare valca alebo lievika a spodnej nosnej časti prístroja s takzvaným filtračným stolom vyrobeným z kovovej sieťoviny alebo čistej keramickej platne, na ktorej je umiestnená membrána alebo azbest. je umiestnený filter. Nosná časť prístroja má tvar lievika, ktorého zužujúca sa časť je umiestnená v gumovej zátke hrdla Bunsenovej banky. V prevádzkovom stave je horná časť zariadenia pripevnená k spodnej časti pomocou skrutiek. Než začnete filtrovať križovatku rôzne časti inštalácie na vytvorenie tesnosti sú naplnené parafínom. Výstupná trubica banky je spojená hrubostennou gumovou trubicou s vodným lúčom, olejovým alebo bicyklovým čerpadlom. Potom sa prefiltrovaná kvapalina naleje do valca alebo lievika prístroja a zapne sa čerpadlo, čím sa v zbernej nádobe vytvorí vákuum. Výsledkom výsledného tlakového rozdielu je, že prefiltrovaná kvapalina prechádza cez póry filtra do zberača. Mikroorganizmy zostávajú na povrchu filtra.

Príprava náterov

Na štúdium mikroorganizmov vo farbenej forme sa urobí náter na podložnom sklíčku, vysuší sa, zafixuje a potom zafarbí.

Testovaný materiál sa rozdelí v tenkej vrstve na povrch dobre odmasteného podložného sklíčka.

Nátery sa pripravujú z mikrobiálnych kultúr, patologického materiálu (spúta, hnis, moč, krv atď.) az orgánov mŕtvych tiel.

Technika prípravy náterov je určená povahou študovaného materiálu.

Príprava náterov z mikrobiálnych kultúr s tekutým živným médiom a z tekutého patologického materiálu (moč, likvor a pod.). Malá kvapka testovacej kvapaliny sa nanesie bakteriálnou slučkou na podložné sklíčko a krúživými pohybmi sa slučky rozložia v rovnomernej vrstve v tvare kruhu s priemerom grošovej mince.

Príprava krvných náterov. Na podložné sklíčko, bližšie k jednému z jeho koncov, sa nanesie kvapka krvi. Druhé – zábrusové – sklo, ktoré by malo byť užšie ako objektové sklo, priložíme na prvé pod uhlom 45° a privedieme ku kvapke krvi, kým sa s ňou nedotkne. Po rozšírení krvi pozdĺž lešteného okraja sa urobí posuvný pohyb so sklom sprava doľava, čím sa krv rovnomerne rozloží v tenkej vrstve po celom povrchu skla. Hrúbka ťahu závisí od uhla medzi okuliarmi: čím je uhol ostrejší, tým je ťah tenší. Správne pripravený náter má svetloružovú farbu a rovnakú hrúbku.

Príprava hustej kvapky. Do stredu podložného sklíčka sa aplikuje kvapka krvi pomocou Pasteurovej pipety alebo sa sklo priloží priamo na vyčnievajúcu kvapku krvi. Krv nanesená na pohár sa potrie bakteriálnou slučkou tak, aby priemer výsledného náteru zodpovedal veľkosti grošovej mince. Pohár sa nechá vo vodorovnej polohe, kým krv nezaschne. Krv v „hrubej kvapke“ je rozložená nerovnomerne a tvorí nerovný okraj.

Príprava náteru z viskózneho materiálu (spúta, hnis). Spútum alebo hnis aplikovaný na sklíčko bližšie k úzkemu okraju sa prekryje ďalším sklíčkom. Okuliare sú mierne pritlačené k sebe.

Potom sa voľné konce pohára chytia prstami 1 a 2 oboch rúk a pohybujú sa opačnými smermi tak, aby pri pohybe oba poháre tesne priliehali k sebe. Výsledkom sú šmuhy s rovnomerne rozloženým materiálom, ktoré zaberajú veľkú plochu.

Príprava náterov z kultúr z pevných živných pôd. Do stredu čistého, dobre vymasteného podložného sklíčka sa vloží kvapka vody a do nej sa vloží bakteriálna slučka s malým množstvom skúmanej mikrobiálnej kultúry, čím sa kvapka tekutiny mierne zakalí. Potom sa prebytočný mikrobiálny materiál na slučke spáli v plameni a náter sa pripraví podľa vyššie opísanej metódy.

Príprava náterov z orgánov a tkanív. Za účelom dezinfekcie sa povrch orgánu kauterizuje nahriatymi čeľusťami pinzety, na tomto mieste sa urobí rez a z hĺbky sa špicatými nožnicami vyreže malý kúsok tkaniva, ktorý sa vloží medzi dve podložné sklíčka . Ďalej postupujte rovnako ako pri príprave náteru z hnisu a hlienu. Ak je tkanivo orgánu husté, potom sa z hĺbky rezu urobí škrabanie skalpelom. Materiál získaný zoškrabaním sa v tenkej vrstve rozotrie po povrchu skla skalpelom alebo bakteriálnou slučkou.

Na štúdium relatívnej polohy tkanivových prvkov a mikroorganizmov v nich sa vyrábajú odtlačky prstov. Na tento účel sa pinzetou chytí malý kúsok tkaniva vyrezaný zo stredu orgánu a narezaným povrchom sa niekoľkokrát postupne aplikuje na podložné sklíčko, čím sa získa séria odtlačkov.

Sušenie a fixácia šmúh. Náter pripravený na podložnom sklíčku sa vysuší na vzduchu a po úplnom vysušení sa zafixuje. Pri fixácii je náter fixovaný na povrchu podložného sklíčka, a preto pri následnom farbení preparátu nedochádza k zmývaniu mikrobiálnych buniek. Usmrtené mikrobiálne bunky sa navyše farbia lepšie ako živé.

Existuje fyzikálna metóda fixácie, ktorá je založená na vplyve vysokej teploty na mikrobiálnu bunku, a chemické metódy, pri ktorých sa používajú prostriedky, ktoré spôsobujú koaguláciu bielkovín. Nezaznamenávajte nátery obsahujúce patogény skupiny patogenity I–II nad plameňom.

Fyzikálny spôsob fixácie. Sklíčko s prípravkom sa odoberá pinzetou alebo prstami I a II pravá ruka za rebrá ťahajte nahor a plynulým pohybom prejdite 2-3 krát cez hornú časť plameňa horáka. Celý proces fixácie by nemal trvať dlhšie ako 2 sekundy. Spoľahlivosť fixácie sa kontroluje nasledujúcou jednoduchou technikou: povrch podložného skla bez rozmazania sa nanesie na zadnú plochu ľavej ruky. Keď je náter správne zafixovaný, sklo by malo byť horúce, ale nemalo by spôsobovať pocit pálenia.

Metóda chemickej fixácie. Používajú sa aj na fixáciu šmúh. chemických látok a zlúčeniny uvedené v tabuľke 4.

Tabuľka 4.

Látky na chemickú fixáciu

Sklíčko so zaschnutým náterom sa ponorí do fľaštičky s fixačným prostriedkom a následne sa vysuší na vzduchu.

Farebné ťahy

Technika maľovania náterom. Na farbenie šmúh sa používajú roztoky farieb alebo farbiaci papier, ako navrhuje A.I. Sinev. Jednoduchosť prípravy, jednoduchosť použitia, ako aj možnosť skladovať atramentový papier na neobmedzene dlhú dobu boli základom pre ich široké využitie v rôznymi spôsobmi sfarbenie.

Farebné ťahy atramentovým papierom. Na zaschnutý a fixovaný prípravok sa nanesie niekoľko kvapiek vody a priložia sa farebné papieriky s rozmermi 2´2 cm. Po celú dobu farbenia by mal papier zostať vlhký a tesne priliehať k povrchu skla. Pri sušení sa papier dodatočne navlhčí vodou. Trvanie farbenia náteru je určené metódou farbenia. Na konci farbenia opatrne odstráňte papier pomocou pinzety a umyte škvrnu. voda z vodovodu a vysuší sa na vzduchu alebo filtračným papierom.

Farbenie sa rozmazáva roztokmi farbív. Farbivo sa na zaschnutý a fixovaný prípravok nanáša pipetou v takom množstve, aby pokrylo celý náter. Pri farbení náterov koncentrovanými roztokmi farbív (Ziehl karbol fuchsín, karbolický horec alebo kryštálová violeť) sa farbenie robí cez filtračný papier, ktorý zadržiava častice farbiva: pásik filtračného papiera sa položí na fixovaný náter a naleje sa naň roztok farbiva. .

Na mikroskopické vyšetrenie sa pripravené nátery, vysušené a fixované, zafarbia. Farbenie môže byť jednoduché alebo zložité. Jednoduché maľovanie zahŕňa nanášanie jednej farby na škvrnu na určité časové obdobie. Najčastejšie sa na jednoduché farbenie používa alkohol-voda (1:10), Pfeiffer fuchsín, Lefflerova metylénová modrá a safranín. Eozín, podobne ako kyslá farba, sa používa iba na farbenie cytoplazmy buniek a tónovanie pozadia. Na farbenie baktérií je úplne nevhodný kyslý fuchsín.